腎切除慢性腎衰竭動物模型【北京動物造?！?/p>

【造模機制】大鼠 5/6 腎切除后殘存腎單位出現(xiàn)高灌注,高濾過和高壓力,進而導致腎小球硬化和殘余腎單位的進一步破壞,出現(xiàn)以腎小球肥大、硬化等為主要特點的慢性腎衰竭的腎間質(zhì)纖維化病變。

【造模方法】

1.動物及分組選用 90 只清潔級雄性 Wistar 大鼠,6~8 周齡,體重(200±20)g。按1：2比例隨機分為兩組,假手術(shù)組(SOR) 30 只和 5/6 腎切除術(shù)(nephrectomy, NT)組60只。

2.模型制備采用二期法:速眠新Ⅱ號 1ml/kg 大腿肌內(nèi)注射麻醉大鼠,選取背部左側(cè)切口,暴露左腎,剝離腎包膜,將腎的上下級各 1/3 切除,明膠海綿壓迫切面止血。1 期手術(shù)后 7天,行 2期手術(shù),同樣方法麻醉,右側(cè)背部切開暴露右腎,結(jié)扎腎蒂,摘除右腎。假手術(shù)組與5/6NT 組動物周期進行二次手術(shù),但僅剝離腎包膜暴露腎臟后關(guān)腹。5/6NT 組于二期手術(shù)后 30、60、90 天,每組隨機選取 15、15、18 只大鼠處死。處死前一天將大鼠置于代謝籠中(禁食,不禁水),收集 24 小時尿液測尿量,大鼠 24 小時尿經(jīng)離心(2000z/min,10min)，去除沉渣。

3.樣本采集和指標測定麻醉下心臟采血,血液收集后經(jīng)離心分離出血清,尿液和血清均保存于一20℃冰箱。取左腎組織稱重,用4%多聚甲醛固定,石蠟包埋。全自動生化分析儀檢測 24 小時尿蛋白、血清肌酐及尿素氮。腎組織經(jīng) 4%多聚甲醛固定、包埋,切成 3pm 厚石蠟切片,做蘇木素-伊紅(HE)染色。測定腎小球面積(Gx),腎小球毛細血管袢體積(Gy),對腎小球硬化,腎小管間質(zhì)損傷程度進行評分,計數(shù)間質(zhì)浸潤的炎癥細胞。α平滑肌動蛋白(a-SMA)的表達按試劑盒說明進行免疫組織化學染色。采用Floege 半定量法進行評定。

【模型特點】 5/6 腎切除后,系膜細胞和系膜基質(zhì)增生,腎小球硬化,腎小管灶狀萎縮，間質(zhì)纖維化,表現(xiàn)出與人類腎臟纖維化相一致的病理過程。

1. 5/6 腎切除組 24 小時尿蛋白定量、血尿素氮、血肌酐水平明顯高于假手術(shù)組(P<0.05）。

2.殘腎的腎重/體重逐漸增加到術(shù)后 90 天時,幾乎接近假手術(shù)組大鼠左腎腎重/體重。

3.5/6 腎切除后殘腎腎小球面積和腎小球毛細血管體積增加,腎小球硬化指數(shù)(GSI)及腎小管間質(zhì)損傷評分(TIS)明顯高于假手術(shù)組(P<0.05)。

4.免疫組化結(jié)果顯示： 5/6 腎切除組腎間質(zhì)和小管上皮細胞 α-SMA 表達增加。

5.腎小球面積I GSI.a-SMA 表達與血肌酐、蛋白尿水平呈明顯正相關(guān)性。

【應用范圍】研究慢性腎衰竭的發(fā)病機制和治療方法。特別在醫(yī)學研究中腎氣虛證并兼有濕濁或瘀血,以“健脾益腎,通腑降濁、活血化瘀”法治療有特殊用途。

【注意事項】

1.手術(shù)要熟練最好由1人操作,以減少損傷誤差。

2.手術(shù)時特別注意防止損傷腎上腺摘除腎臟時要結(jié)扎牢腎蒂。

3.切除腎臟時最好在腹膜處進行盡量不打開腹腔進入腹腔,以減少感染機會。

4.如果用藥時間長或需要損傷程度輕,可在手術(shù)前用低蛋白飼料。

5.最好設立假手術(shù)組代替正常動物對照組。

【模型評估】 5/6 腎切除 CRF 模型符合腎小球高度濾過致腎衰竭學說,其優(yōu)點是在保護殘存腎組織相對正常的情況下造成殘存腎組織超負荷工作模型,排除了各種原發(fā)腎臟疾病的致病因素本身對殘存腎單位的影響,使影響因素簡單化,以便于觀察“正?！睔埓婺I單位在大部分腎組織喪失的情況下所發(fā)生的一系列改變及其機制。在評價具有減輕腎組織灌流,高濾過及抑制系膜細胞增殖和抗氧化作用的新藥時此模型更為適用。該模型的缺點是需要有相應手術(shù)場地,對操作技能要求高,且要防止出血和術(shù)后感染,模型制備周期較長。

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