活性氧ROS熒光探針
DCFH(2`,7`-二氯二氫熒光素)(貨號:HCQ000679)
DCFH(2`,7`-二氯二氫熒光素;2`,7`-dichlorodihydrofluorescein)是一種活性氧測量的熒光探針。當被ROS氧化成2′,7′-二氯熒光素化氫探針(2′,7′-dichlorofluorescein, DCF)時, 即發(fā)出強烈熒光,DCFH 具有更好的脂溶性和透膜性, 因此被廣泛地應(yīng)用于細胞內(nèi)ROS的檢測。
圖1.DCFH化學(xué)結(jié)構(gòu)
二氫羅丹明123(貨號:HCM0016B)
二氫羅丹明123?(DHR 123) 是一種可滲透細胞的熒光探針,可用于檢測活性氧 (ROS),例如過氧化物和過氧亞硝酸鹽。二氫羅丹明123 在被 ROS 氧化為高熒光產(chǎn)物 Rhodamine 123 之前不會發(fā)出熒光。 單獨的 NO、超氧化物和過氧化氫似乎都不會氧化 DHR,相反,這些 ROS 被認為與其他細胞成分(如細胞色素 c 氧化酶或 Fe2+)結(jié)合,以將 二氫羅丹明123 氧化為其熒光衍生物羅丹明 123。羅丹明 123 的形成 可以分別使用 500 和 536 nm 的激發(fā)和發(fā)射波長通過熒光光譜進行監(jiān)測,或者通過 500 nm (ε = 78,800 M-1cm-1) 的吸收光譜進行監(jiān)測。
圖2.二氫羅丹明123?(DHR 123)熒光光譜
DCFH-DA(貨號:SS1967)
DCFH-DA (2,7-二氯熒光素二乙酸酯)是一種可滲透細胞的熒光探針,DCFH-DA可用于檢測活性氧(ROS)和一氧化氮(?NO)以及確定總體氧化應(yīng)激程度。細胞濃度為一百萬至二千萬/毫升。
使用案例
圖3.用DCFH-DA染色的H358細胞以成像ROS生產(chǎn)。第一列是未處理的細胞作為陰性對照。第二列是陽性對照,其中細胞被施以10%,20和30%的H 2 O 2溶液15分鐘,并用DCFH-DA成像。第三、第四和第五列顯示H358細胞,其中有各種復(fù)合物的相對IC 50值,如下所示:4 4+(15mM),3 3+(13mM)和2 2 2+(1.7mM)在指示的3個時間段內(nèi)。然后施用DCFH-DA30分鐘,并使用共聚焦顯微鏡(488/519nm)成像。