本文詳述小鼠胰島β細(xì)胞的精準(zhǔn)分離和規(guī)范培養(yǎng)流程，涵蓋所需實驗材料、試劑及儀器信息。

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實驗材料與試劑：該實驗選用3-4周齡的昆明小鼠。主要試劑包括小鼠胰島β細(xì)胞專用培養(yǎng)基、DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基、胎牛血清、混合膠原酶和Percoll等，均購自無錫菩禾。

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實驗儀器：涉及的儀器有CO2恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴搖床、低速臺式離心機(jī)、解剖顯微鏡和相差顯微鏡，分別由SANYO、常州市國立試驗設(shè)備研究所、湘儀離心機(jī)儀器有限公司、鳳凰光學(xué)集團(tuán)有限公司和OLYMPUS生產(chǎn)。

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分離步驟：實驗動物經(jīng)75%酒精消毒后，先以脫白法處死，進(jìn)而剪開腹部、分離臟器并夾住膽管。隨后，用膠原酶溶液緩慢灌注胰腺，然后切除胰腺并去除脂肪及結(jié)締組織。胰腺在預(yù)冷膠原酶溶液中38℃水浴10分鐘，再用含10%FBS的DMEM HIGH培養(yǎng)基終止消化。

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培養(yǎng)步驟：細(xì)胞經(jīng)PBS沖洗和Percoll密度梯度分離后，用胰蛋白酶進(jìn)行37℃消化以得到單個胰島細(xì)胞。這些細(xì)胞隨后在37℃、5% CO2的條件下用小鼠胰島β細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞融合達(dá)到80%~90%時，即可用于后續(xù)實驗。

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通過以上規(guī)范操作，可實現(xiàn)小鼠胰島β細(xì)胞的高效分離與培養(yǎng)，為后續(xù)實驗提供了質(zhì)量可控的細(xì)胞材料。