第二十一章：DNA重組及重組DNA技術(shù)

第二節(jié)：重組DNA技術(shù)

重組DNA技術(shù)=分子克隆=DNA克隆=基因克?。豪孟拗菩詢?nèi)切酶，DNA連接酶等，將經(jīng)過剪接的外源DNA與載體DNA連接并轉(zhuǎn)化到特定的宿主細(xì)胞中進(jìn)行DNA基因表達(dá)的技術(shù)，產(chǎn)生人們所需要的產(chǎn)物。

1.目的基因的獲取：主要包括化學(xué)合成法，DNA文庫(kù)法，cDNA文庫(kù)法和pcr技術(shù)

2.載體的選擇與構(gòu)建：目的基因要進(jìn)入受體細(xì)胞，必須有一個(gè)載體將其帶入細(xì)胞內(nèi)，并隨外源DNA一起復(fù)制和表達(dá)

3.目的基因與載體的連接：連接方式主要有黏性末端連接，平端連接，人工接頭連接等。

4.轉(zhuǎn)化：外源DNA進(jìn)入受體細(xì)胞并使它獲得新的遺傳特性的過程為轉(zhuǎn)化，此外還有轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)導(dǎo)等方法。

5.重組體篩選：由于細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率較低，需要從大量的宿主細(xì)胞中篩選出帶有重組體的細(xì)胞

6.外源基因的表達(dá)：將導(dǎo)入的外源基因利用宿主的遺傳信息表達(dá)系統(tǒng)復(fù)制、轉(zhuǎn)錄，表達(dá)有活性的目的蛋白

補(bǔ)充：

酵母雙雜交原理：

真核轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合區(qū)BD和轉(zhuǎn)錄結(jié)合區(qū)AD在功能和實(shí)質(zhì)上都是可分的，BD能把蛋白定位到基因組特定DNA序列上，AD能夠使轉(zhuǎn)錄裝置激活基因轉(zhuǎn)錄。將兩個(gè)目的蛋白分別與AD和BD融合產(chǎn)生新的融合蛋白，如果這兩個(gè)目的蛋白能夠互相作用，則該相互作用會(huì)促使AD和BD相互靠近而產(chǎn)生有活性的轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)而激活事先構(gòu)建到酵母基因組中報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。

基因組學(xué)：基因組學(xué)是闡明整個(gè)基因組結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系以及基因之間相互作用的科學(xué)。