海星生物|細(xì)胞收貨處理方法
今天海星為大家介紹下細(xì)胞的幾種不同運輸收貨后的處理方法：
一、?T25培養(yǎng)瓶細(xì)胞（常溫運送）
?請在收到細(xì)胞后，先檢查培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否外滲，培養(yǎng)液是否渾濁，并核對瓶身上的標(biāo)簽信息，細(xì)胞數(shù)量是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。
用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，先不要打開培養(yǎng)瓶，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置1-2 h,待細(xì)胞恢復(fù)基本生長狀態(tài)后，再進行后續(xù)操作。
顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，觀察細(xì)胞時請拍100×、200×各2-3張照片進行留存，所拍照片應(yīng)該盡量清晰。
若細(xì)胞密度低于80%，可在原瓶中留5 mL培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，若細(xì)胞密度大于80%，可進行傳代。
培養(yǎng)瓶運輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用，請及時更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
部分貼壁細(xì)胞在運輸過程中可能會有部分脫落，如發(fā)現(xiàn)有脫落，可收集培養(yǎng)液離心后再接種到新的培養(yǎng)器皿。
二、凍存管細(xì)胞（干冰運送）
請在收到細(xì)胞后，先檢查包裝是否完整，干冰是否充足，凍存管有無破損等情況，并核對細(xì)胞管上的標(biāo)簽信息，細(xì)胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。
低溫保存的細(xì)胞非常脆弱，收到的細(xì)胞如24h內(nèi)復(fù)蘇，可存放于-80℃冰箱；超過24h請存放于液氮中。建議收到細(xì)胞凍存管檢查無誤后，詳細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，盡快復(fù)蘇。
復(fù)蘇細(xì)胞后首次換液之前顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，觀察細(xì)胞時請拍100×、200×各2-3張照片進行留存，所拍照片應(yīng)該盡量清晰。
部分細(xì)胞貼壁時間較長，不建議復(fù)蘇當(dāng)天換液，若復(fù)蘇有異常，請及時跟我們聯(lián)系。
三、?血清管細(xì)胞（常溫運送）
請在收到細(xì)胞后，先檢查包裝是否完整，有無破損漏液的情況，并核對細(xì)胞管上的標(biāo)簽信息，細(xì)胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。
收到細(xì)胞后請盡快進行處理，如不能及時處理，請將細(xì)胞放至常溫環(huán)境，通常15-25℃為佳，并盡量在24 h內(nèi)完成實驗。否則細(xì)胞狀態(tài)和存活率將會受到一定的影響。血清管懸液可能會呈現(xiàn)一定程度的渾濁狀態(tài)，這屬于正?，F(xiàn)象，請放心操作。
將血清管外壁進行常規(guī)消毒后，在超凈臺內(nèi)小心開蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移至15 mL離心管內(nèi)。
吸取1 mL培養(yǎng)基清洗血清管內(nèi)壁，同樣轉(zhuǎn)移至15mL管，并吹打均勻。
取20 μL細(xì)胞懸液至EP管，臺盼藍(lán)染色并計數(shù)，記錄細(xì)胞數(shù)量和存活率。如有異常請及時與我們聯(lián)系。
250 g離心4 min，收集細(xì)胞沉淀，并接種至合適大小的培養(yǎng)器皿中，放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)。
24 h后顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，觀察細(xì)胞時請拍100×、200×各2-3張照片進行留存，所拍照片應(yīng)該盡量清晰。，并根據(jù)匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。
四、細(xì)胞膠囊技術(shù)?
“細(xì)胞膠囊“是由海星生物自主研發(fā)的一種細(xì)胞常溫運輸技術(shù)，這種技術(shù)只需普通試管和培養(yǎng)液便可儲存及攜帶大部分種類的細(xì)胞，并在一周的運輸時間內(nèi)保持細(xì)胞活性高，不成團，適用溫度范圍為10℃至37℃。
“細(xì)胞膠囊”包括細(xì)胞管和溶解Buffer共2個試劑管。請在收到細(xì)胞后，先檢查“細(xì)胞膠囊”管身是否完好，培養(yǎng)液是否外滲，并核對管身上的標(biāo)簽信息，細(xì)胞信息是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。
收到“細(xì)胞膠囊”后請盡快進行實驗，如不能及時處理，請將細(xì)胞放至常溫環(huán)境，通常15~25℃為佳，并盡量在24 h內(nèi)完成實驗?！凹?xì)胞膠囊”管內(nèi)的培養(yǎng)液肉眼觀察可能會呈現(xiàn)一定程度的渾濁狀態(tài)，這屬于正常現(xiàn)象，請放心操作。
用75%酒精消毒試劑管表面，在超凈臺內(nèi)小心的打開細(xì)胞膠囊管蓋，盡量避免氣泡溢出。
使用移液槍吸取細(xì)胞膠囊管中的液體，全部棄去。
將Buffer全部加入到細(xì)胞膠囊管中，擰緊管蓋，上下顛倒3-5 min。
觀察到細(xì)胞膠囊完全溶解后，小心開蓋，使用移液槍輕柔吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移到15 mL離心管內(nèi)。
250 g離心4 min。
離心后收集細(xì)胞沉淀，加入完全培養(yǎng)基重懸后，將細(xì)胞懸液接種到合適大小的培養(yǎng)器皿中，放置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
24 h后顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)并拍照。建議留存100×、200×照片各2~3張。如有異常請及時與我們聯(lián)系。
后續(xù)根據(jù)細(xì)胞匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。
細(xì)胞膠囊處理流程圖
注意事項
建議細(xì)胞靠前代次保種。首次傳代時細(xì)胞離心后收集到的細(xì)胞較多時可以少量凍存保種。
部分細(xì)胞培養(yǎng)需要提前包被培養(yǎng)瓶，具體請詳細(xì)閱讀說明書后進行操作。
作者：海星生物
公眾號：Cas9X細(xì)胞基因敲除
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