phi29 DNA 聚合酶是一種具有高持續(xù)合成能力的聚合酶（高于 70 kb）

具有強大的鏈置換活性，可實現(xiàn)高效等溫 DNA 擴增。

1.單細胞基因組擴增

德國QIAGEN公司推出的“REPLI-g Single Cell Kit含有REPLI-g sc Polymerase”，這是一種優(yōu)化的新型高保真Phi 29聚合酶。該試劑盒采用多重置換擴增技術(shù)擴增復雜的基因組DNA，溫和的堿孵育能夠避免DNA片段化，促進對所有位點的無偏差擴增。該試劑盒十分適用于分離的腫瘤細胞或細菌細胞等單一細胞，能夠擴增獲得高產(chǎn)量DNA。此外，該試劑盒還配有專用于鮮血或干血、新鮮或冷凍組織的實驗方案，可用于多種研究樣本。常規(guī)DNA產(chǎn)量可達40 μg，對模板的起始量要求低，因此進行后續(xù)遺傳分析時無需檢測DNA濃度。REPLI-g Single Cell Kit的擴增產(chǎn)物平均長度超過10 kb，且覆蓋所有位點，適合于多種應用，包括二代測序、基于芯片技術(shù)的比較基因組雜交、焦磷酸測序和real-time PCR分析

2.單細胞轉(zhuǎn)錄組擴增：

REPLI-g WTA Single Cell Kit包含新穎的REPLI-g SensiPhi DNA聚合酶，以及從1–1000個細胞或等量的小量樣本進行全轉(zhuǎn)錄本擴增（WTA）的優(yōu)化緩沖液和試劑。高效裂解細胞、徹底清除基因組DNA（gDNA）和敏感的逆轉(zhuǎn)錄物之后，采用多重置換擴增（MDA）技術(shù)，以可以忽略的序列偏差對整個轉(zhuǎn)錄本均一地擴增cDNA（參見?Multiple Displacement Amplification (MDA) technology）。使用REPLI-g WTA Single Cell Kit擴增的cDNA，經(jīng)證明在二代測序技術(shù)（NGS）和real-time PCR應用中具有各細胞間和各次實驗間的高度可重復性（參見?High level of experimental reproducibility）。擴增的cDNA可以輕松地應用于各種下游應用（參見?REPLI-g amplified cDNA performs like gDNA in downstream experiments）。

3.全基因組和全轉(zhuǎn)錄組擴增

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REPLI-g Cell WGA & WTA Kit 可以直接從細胞中有效擴增gDNA和cDNA，并且可以與經(jīng)常在臨床研究分析中出現(xiàn)的各種樣本一起使用，包括腫瘤細胞、干細胞、分選細胞或其它小量樣本

·?細胞裂解：在5分鐘內(nèi)將樣本（含有25–1000個細胞）有效地裂解，同時保持RNA或DNA的完整性。裂解的細胞被分為相等體積的兩等份。第一等份試樣用于WGA，而第二等份試樣用于總RNA的WTA，或富集mRNA（poly A +）RNA。

·?全基因組擴增 ：細胞裂解之后，一等份試樣中的DNA被修飾用于高效的連接反應。由于該連接反應的性質(zhì)，DNA片段并未按照它們原本存在于生物體中的順序組裝。然而，這并不影響下游應用中的核酸序列檢測（例如，基因多態(tài)性），例如NGS、芯片分析或者qPCR。連接反應后，使用MDA技術(shù)和新穎的、高親和力REPLI-g SensiPhi DNA Polymerase進行擴增。

·?全轉(zhuǎn)錄本擴增：細胞裂解后，在開始WTA處理之前，gDNA被從第二等份試樣中去除，這是由于轉(zhuǎn)錄水平的精確測量依賴于能否消除gDNA污染所造成的假陽性結(jié)果。然后利用高效率的連接反應與擴增反應制備cDNA。根據(jù)隨后的逆轉(zhuǎn)錄反應過程中所選擇的底物，所有總RNA富集的轉(zhuǎn)錄物或只有poly A+ mRNA富集的多聚腺苷酸轉(zhuǎn)錄物將會被擴增。

4.全基因組和全轉(zhuǎn)錄組建庫試劑盒?

QIAseq FX Single Cell DNA Lib. Kit (96)????180715

? ? 該試劑盒可從單個細胞（包括具有高GC含量的區(qū)域）提供出色的基因組覆蓋范圍。與基于PCR的全基因組擴增方法相比，QIAseq FX單細胞DNA庫試劑盒中包含的多置換退火技術(shù)消除了PCR重復，并最大程度地減少了GC偏差，從而確保了高的文庫多樣性并最大程度地覆蓋了基因組范圍，即使是單細胞也是如此。

QIAseq FX Single Cell RNA Lib. Kit (24)???180733

QIAseq FX單細胞RNA庫工具包依靠高效的MDA反應來擴增cDNA，并生成不需要庫擴增的足夠材料，從而提供了完全無需PCR的工作流程。這消除了PCR重復，并使檢測到的轉(zhuǎn)錄本數(shù)量最大化，包括長轉(zhuǎn)錄本。

民族品牌：absin-您身邊的科研百寶箱

Single Cell Whole Genome Amplification Kit??貨號： abs60071

單細胞全基因組擴增試劑盒基于多重鏈置換擴增的Phi29 DNA聚合酶等溫擴增體系，Phi29 DNA聚合酶是從Bacillus subtilis噬菌體Phi29中克隆出的嗜溫DNA聚合酶，利用基因重組技術(shù)，在大腸桿菌中進行表達后經(jīng)多次純化分離而得。Phi29 DNA聚合酶具有很強的鏈置換活性，可實現(xiàn)對DNA復雜結(jié)構(gòu)的解鏈與復制。同時具有高效的DNA合成能力，可連續(xù)合成多達70kb的DNA片段。Phi29 DNA聚合酶具有很強的3’→5’外切酶活性，保真度高于絕大多數(shù)高保真酶，因此Phi29 DNA聚合酶特別適合用于全基因組擴增。

本試劑盒可以實現(xiàn)單個細胞或者少量樣本的全基因組無差別擴增，一個反應可以達到40μg的全基因組DNA。低質(zhì)量樣品會影響DNA的最終產(chǎn)量，如果以DNA樣品為模板，需避免使用降解的DNA作為起始模板。?

產(chǎn)品特點：

高覆蓋度：經(jīng)過擴增后可達到95%以上的覆蓋度。

高均一度：無偏好擴增，可實現(xiàn)全基因組的均一擴增。

高保真：具有很強的校正功能，保真度高。

高靈敏：可實現(xiàn)從單個細胞樣本的全基因組擴增。

Whole Genome Amplification Kit???貨號： abs60070

全基因組擴增試劑盒基于多重鏈置換擴增的Phi29 DNA聚合酶等溫擴增體系，Phi29 DNA聚合酶是從Bacillus subtilis噬菌體Phi29中克隆出的嗜溫DNA聚合酶，利用基因重組技術(shù)，在大腸桿菌中進行表達后經(jīng)多次純化分離而得。Phi29 DNA聚合酶具有很強的鏈置換活性，可實現(xiàn)對DNA復雜結(jié)構(gòu)的解鏈與復制。同時具有高效的DNA合成能力，可連續(xù)合成多達70kb的DNA片段。Phi29 DNA聚合酶具有很強的3′→5′外切酶活性，保真度高于絕大多數(shù)高保真酶，因此Phi29 DNA聚合酶特別適合用于全基因組擴增。

本試劑盒可以實現(xiàn)少量DNA樣本的全基因組無差別擴增，一個反應可以達到40μg的全基因組DNA。本試劑盒要求DNA樣品不能嚴重降解，以減少因模板量太少造成不平衡擴增。擴增產(chǎn)物可以稀釋后用于后續(xù)的DNA分析。?

產(chǎn)品特點：

高覆蓋度：經(jīng)過擴增后可達到95%以上覆蓋度。

高均一度：無偏好擴增，可實現(xiàn)全基因組的均一擴增。

高保真：具有很強的校正功能，保真度高。

靈敏：可實現(xiàn)極少量樣本的全基因組擴增。

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