小鼠成肌細(xì)胞(C2C12)培養(yǎng)攻畋
C2C12細(xì)胞株是YaffeD,SaxelO建立的小鼠成肌細(xì)胞系的亞株。該細(xì)胞分化較快，可形成能收縮的微管，產(chǎn)生特異的肌肉蛋白。在骨形態(tài)形成蛋白（BMP-2）的作用下，該細(xì)胞可由成肌細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞。檢測發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞鼠痘病毒陰性。
細(xì)胞復(fù)蘇
溶解細(xì)胞過程要迅速；已溶解的凍存細(xì)胞不能在常溫下存放太久，需要盡快離心去除DMSO。
細(xì)胞凍存
凍存條件
60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲(chǔ)存。【推薦海星HyCyte?一步凍存液(即用型、無血清、無需程序降溫)】
細(xì)胞凍存步驟
常規(guī)方法收集對數(shù)期的貼壁 細(xì)胞或懸浮細(xì)胞于離心管中。
按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的大小計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù)(參考數(shù)量: 5x10^5~ 5x10^6cells/mL)。
離心收集細(xì)胞。(參考離心條件: 4℃， 250g，離心4~6 min)。
收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀， 徹底棄去離心管中的上清液。
加入適量的HyCyte? 一步凍存液于離心管中。輕柔地混勻細(xì)胞，制成細(xì)胞混合液。
將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)記的凍存管中，建議每管1 mL或1.5 mL。
立即將凍存管直接置于-80°C冰箱中(直立放置)完成"一步"凍存操作, 24小時(shí)后移入液氮或者-80C長期保存。細(xì)胞凍存時(shí)，盡量吹散細(xì)胞，注意控制吹打力度。
細(xì)胞培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基：DMEM-H+10%FBS+1%P/S
推薦傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃
傳代操作
去掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，加入PBS進(jìn)行沖洗，并去上清;
加入胰酶進(jìn)行潤洗，并去上清;放入CO2培養(yǎng)箱消化2-4min;加入完全培養(yǎng)基終止消化，并吹打均勻。
常見問題及解答
為什么會(huì)出現(xiàn)空泡？
可能是鋪板時(shí)鋪得不夠均勻，局部過于密集，密集地方的細(xì)胞就開始狀態(tài)變差、空泡增多。也可能是血清差，需要更換優(yōu)質(zhì)血清，及時(shí)換液。
為什么細(xì)胞長得慢？
可能是細(xì)胞接種得太少，細(xì)胞密度太低?？梢韵扰囵B(yǎng)，然后消化重新鋪瓶，提高密度培養(yǎng)。
為什么細(xì)胞狀態(tài)變差，容易漂？
可能是血清問題，建議換血清，并注意血清要程序解凍，不能水浴化開；也有可能是細(xì)胞生長密集，需要及時(shí)傳代，并不是細(xì)胞長滿才傳代，當(dāng)有個(gè)別地方長得過于密集，容易疊加的時(shí)候應(yīng)該就要傳代了。
注 意
在培養(yǎng)過程中，保持細(xì)胞匯合度30％～90％每一步操作都要輕柔小心，以免細(xì)胞受損選用優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基，減少有害物質(zhì)對細(xì)胞的刺激
作者：海星生物
公眾號(hào)：Cas9X細(xì)胞基因敲除
以上內(nèi)容由海星生物（http://www.cas9x.com)提供
服務(wù)內(nèi)容：CRISPR/Cas9細(xì)胞基因編輯 載體構(gòu)建/病毒包裝 PDO/動(dòng)物模型CDX 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株 干細(xì)胞/原代細(xì)胞 培養(yǎng)試劑盒
