顯微鏡法細(xì)胞計(jì)數(shù)

如果能有既便宜有好用的樹脂類，適合顯微鏡法使用的細(xì)胞計(jì)數(shù)板是最好的，一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)板主要有以下幾個好處：

1.?一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)板可以省去清理細(xì)胞計(jì)數(shù)板的時間;

2.?一次性計(jì)數(shù)板腔體表面不會出現(xiàn)被磨損和污染的問題；

3.?一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)板一次成型免去蓋玻片的使用；

4.?液滴表面張力會影響蓋玻片與計(jì)數(shù)板底部接觸面問題；

5.?一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)板市場目前只有BIOFOUNT和WASTON兩個品牌，BIOFOUNT的性價比更高，使用成本上較玻璃計(jì)數(shù)板更有優(yōu)勢。

?

使用傳統(tǒng)玻璃細(xì)胞計(jì)數(shù)板時：首先需要用透鏡紙仔細(xì)清潔鏡面拋光表面。蓋玻片也必須進(jìn)行了清潔避免影響視窗。一般計(jì)數(shù)腔的蓋玻片是特制的，相比傳統(tǒng)顯微鏡的蓋玻片更厚，因?yàn)樗鼈儽仨氉銐蛑夭拍芸朔坏我后w的表面張力（一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)板一體成型不存在液滴表面張力問題）。

?

在放置細(xì)胞懸浮液之前，將蓋玻片放置在計(jì)數(shù)表面上。用移液器或其他類型的移液管將懸浮液引入其中一個計(jì)數(shù)腔內(nèi)。蓋玻片下的區(qū)域通過微流孔作用自然填充。所以應(yīng)該填入足夠的液體避免出現(xiàn)空腔，以便剛好覆蓋鏡面。然后將帶有懸浮液的計(jì)數(shù)板放置在顯微鏡載物臺上，并在低功率下使計(jì)數(shù)格柵聚焦。

?

使用更高功率的物鏡時必須格外小心，因?yàn)橛?jì)數(shù)腔比傳統(tǒng)的滑塊厚得多。如果用戶不小心，可能會損壞腔室或物鏡。在具有Neubauer的標(biāo)準(zhǔn)血細(xì)胞儀上，可以在40x（4倍物鏡）處看到一個完整的網(wǎng)格。主要分區(qū)將網(wǎng)格劃分為9個大正方形（如井字網(wǎng)格）。每個正方形的表面積為1平方毫米，腔室的深度為0.1毫米。因此，整個計(jì)數(shù)網(wǎng)格位于0.9毫米立方體的體積下。

?

比如：在使用Neubaue型 計(jì)數(shù)方法時，在所述的五個小方塊中計(jì)數(shù)187個細(xì)胞。每個正方形的面積為1/25平方毫米（即0.04平方毫米），深度為0.1毫米。每個正方形的總體積為（0.04）x（0.1）=0.004立方毫米。計(jì)數(shù)板中五個正方形腔，其組合體積為5x（0.004）=0.02立方毫米。因此，你計(jì)算出0.02立方毫米體體積中的含有187個細(xì)胞，得出187/（0.02）=9350個細(xì)胞/每立方體毫米。一立方厘米（相當(dāng)于一毫升）= 1000立方毫米，所以你的細(xì)胞濃度是：9350000個細(xì)胞/每毫升。

?

如果是大細(xì)胞，需要在更大的表面積腔體上進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。例如：選取每個正方形的表面積為1平方毫米的區(qū)域，腔體深度同樣為0.1毫米，體積為0.1立方毫米。假設(shè)在五個正方形中數(shù)了125個細(xì)胞（總共）。然后，每0.5毫米立方體有125個細(xì)胞，即每立方毫米體積內(nèi)有250個細(xì)胞。再次乘以1000，就可以確定250000個細(xì)胞/每毫升。

?

細(xì)胞濃度過大，有時需要對細(xì)胞懸浮液進(jìn)行稀釋，使細(xì)胞密度足夠低，更方便進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。在這種情況下，需要將最終計(jì)數(shù)濃度乘以稀釋系數(shù)。例如：假設(shè)為了計(jì)數(shù)，必須將衣原體的懸浮液稀釋10倍。實(shí)驗(yàn)獲得了如上所述的250000個細(xì)胞/ml的最終計(jì)數(shù)濃度。但是，原始（未稀釋）懸浮液中的計(jì)數(shù)濃度應(yīng)該為10 x 250000，即2500000個細(xì)胞/ml。