純蛋白分子篩
蛋白純化是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要內(nèi)容,要研究一個蛋白質(zhì),首先要將其從生物樣品中分離純化出來。蛋白質(zhì)的純度對后續(xù)的蛋白質(zhì)研究也至關(guān)重要,含有雜質(zhì)的樣品往往會導(dǎo)致不準(zhǔn)確的分析結(jié)果。蛋白純化主要是依據(jù)蛋白質(zhì)的相似性和差異性來開展的,根據(jù)蛋白質(zhì)的相似性可以將蛋白質(zhì)與非蛋白質(zhì)區(qū)分開來,而不同的蛋白質(zhì)的分子量和形狀等差異可以作為進(jìn)一步分離的依據(jù)。
常用的蛋白質(zhì)純化方法大多都是基于色譜的技術(shù),根據(jù)不同的分離原理可以分為凝膠過濾色譜、離子交換色譜、親和色譜以及疏水色譜等。凝膠過濾色譜也稱尺寸排阻色譜或分子篩色譜,根據(jù)蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量以及形狀大小對蛋白進(jìn)行分離純化,是最簡單、最溫和的一種純化方法。凝膠過濾色譜利用多孔的球形顆粒作為固定相,這種多孔的球形顆粒起到分子篩的作用,小分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)可以進(jìn)入孔中,滯留時間長,最后洗脫出來;而大分子量的蛋白質(zhì)不能進(jìn)入孔中,直接隨流動相從固定相的間隙中流過,滯留時間短,因而最早洗脫出來,各種不同的蛋白質(zhì)組分則因受到的排阻能力不同而得以分離。
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