鉛離子/鎘離子探針
鉛離子/鎘離子探針(Leadmium green AM dye) 提供了一種獨特的工具,能夠以高靈敏度特異性測量細胞內(nèi)鉛和鎘水平。Leadmium 綠色 AM 指示劑專為檢測活細胞中的這些有毒環(huán)境污染物而設(shè)計。
Leadmium green AM dye產(chǎn)品特點:
※ 用于細胞內(nèi)鉛和鎘含量測量的高度特異性指示劑
※ 靈活的形式允許用于多種檢測方式—流式細胞分析、熒光顯微鏡成像以及微孔板讀數(shù)儀
※ 明亮的熒光和對鈣的高分辨力,可檢測出納摩爾水平的鉛和微摩爾水平的鎘
※ 采用 488 nm 激光線輕松激發(fā)
※ ?Leadmium 綠色 AM 染料易于加載,在酯酶切割乙酰氧基甲基基團后能很好地保留在細胞內(nèi)
實驗前試劑準備
1.需要準備但未提供的材料
※ PbCl2 溶液
※ CdCl2 溶液
※ 四-(2-吡啶基甲基)乙二胺(TPEN)
※ 乙醇
※ 離子霉素鈣鹽
※ 死細胞染色劑,例如碘化丙啶(1.0 mg/mL 水溶液); SYTOX? Red 死細胞染料用于 633 或 635 nm 激發(fā)(5 μM 溶液在二甲基亞砜中); 或用于流式細胞術(shù)的 SYTOX? Blue 死細胞染料(1 mM DMSO 溶液)
3.試劑準備
3.1 從冰箱內(nèi)取出一管Leadmium? Green AM dye(50 μg),讓其回溫到室溫,避光保存。
3.2 往管子內(nèi)加入50μl 高質(zhì)量無水的DMSO(Cat#:MS4601-100mL),避光混勻,使其充分溶解。
3.3 用生理鹽水按照1:10的比例將Leadmium? Green AM dye的DMSO儲存液稀釋成工作液(比如取20μl 儲存液加到180μl生理鹽水,混勻),所有溶液制備過程一直避光。
3.4 37℃溫育生理鹽水,用于后續(xù)多個步驟的清洗過程。
3.5 【可選】如果此實驗需要設(shè)置相對對照(用已經(jīng)濃度的PbCl2處理細胞),建議PbCl2的起始濃度范圍是1nM-625nM。制備625nM PbCl2【添加250μl 10μM PbCl2到3.75ml生理鹽水。然后做9次連續(xù)性梯度稀釋最終得到1nM PbCl2】。37℃保存這些溶液直到需要。每個濃度需要1ml量。
3.6 【可選】如果此實驗需要設(shè)置相對對照(用已經(jīng)濃度的CdCl2處理細胞),建議CdCl2的起始濃度范圍是1μM-250μM。制備250μM CdCl2【添加1ml 1mM CdCl2到3ml生理鹽水。然后做8次連續(xù)性梯度稀釋最終得到1μM CdCl2】。37℃保存這些溶液直到需要。每個濃度需要1ml量。
3.7 【可選】制備10mM TPEN工作液,通過添加1.2ml無水乙醇到5mg TPEN。混勻,室溫保存。