? ? ? ?三陰性乳腺癌（TNBC）是指雌激素受體、孕激素受體和原癌基因Her-2的癌組織免疫組織化學(xué)檢查結(jié)果為均為陰性的一種乳腺癌亞型。TNBC占所有乳腺癌類型的10.0%～20.8%，預(yù)后極差，被稱為“乳腺癌之王”。

? ? ? ?前人研究發(fā)現(xiàn)，單跨膜蛋白TEME25為乳腺癌患者有利的預(yù)后和預(yù)測標(biāo)志物，然而其分子機制尚不清楚[1]，因此，研究TMEM25相關(guān)機制有望日后將其應(yīng)用于TNBC的靶向治療。

? ? ? ?廈門大學(xué)和復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院的研究者們先是采用人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和鼠乳腺癌細(xì)胞4T1檢測了TMEM25表達(dá)對TNBC細(xì)胞生長速率的影響，之后通過CRISPR基因編輯技術(shù)對TMEM25基因進(jìn)行敲除和過表達(dá)，以研究TMEM25在調(diào)節(jié)TNBC進(jìn)展中的作用。結(jié)果顯示，敲除TMEM25基因可以顯著促進(jìn)MDA-MB-231和4T1細(xì)胞的生長，而過表達(dá)TMEM25則顯著抑制了細(xì)胞生長(圖1)。后續(xù)，研究者們通過免疫印跡實驗進(jìn)一步證實了這一結(jié)果。同時，這也表明了TMEM25在TNBC靶向治療中的巨大潛力。

? ? ? ?此外，在這項研究中，研究人員還發(fā)現(xiàn)TMEM25的缺失將通過激活EGFR/STAT3信號通路來促進(jìn)細(xì)胞生長或存活，這可能在TNBC的發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。該結(jié)果表明，TMEM25可以作為一種腫瘤抑制因子抑制TNBC的進(jìn)展[2]。

? ? ? ?CRISPR/Cas9是一種可以對靶向基因進(jìn)行特定DNA修飾的技術(shù)，被廣泛應(yīng)用于基因治療、病毒防治和工業(yè)生產(chǎn)等，具有十分可觀的研究進(jìn)展和應(yīng)用前景?；贑RISPR/Cas9，Ubigene研發(fā)了CRISPR U?基因編輯技術(shù)，相比傳統(tǒng)方法，該技術(shù)將基因編輯效率提升了10-20倍，可輕松實現(xiàn)基因敲除、敲入、點突變及過表達(dá)等。利用CRISPR U?技術(shù)，Ubigene已成功構(gòu)建MDA-MB-231、4T1、MDA-MB-468、MCF7、JIMT-1以及HCC1806等乳腺癌相關(guān)的基因編輯細(xì)胞株。

? ? ? ?若想采用CRISPR U?進(jìn)行基因敲除，Ubigene可以根據(jù)具體需求，結(jié)合基因及細(xì)胞情況，提供3套方案：

? ? ? ?1、小片段敲除，gRNA設(shè)在外顯子2兩端的內(nèi)含子中，敲除外顯子編碼堿基數(shù)為非3倍數(shù)，敲除后可造成移碼。

? ? ? ?2、移碼敲除，gRNA設(shè)在外顯子上，缺失的堿基數(shù)為非3倍數(shù)，敲除后可發(fā)生移碼突變。

? ? ? ?3、大片段敲除，將整個基因的編碼序列敲除，達(dá)到大片段敲除的效果。

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參考文獻(xiàn)：

[1]?Doolan, P. et al. TMEM25, REPS2 and Meis 1: favourable prognostic and predictive biomarkers for breast cancer.?Tumour Biol.?30, 200–209 (2009).

[2]?Bi J, Wu Z, Zhang X, et al. TMEM25 inhibits monomeric EGFR-mediated STAT3 activation in basal state to suppress triple-negative breast cancer progression[J]. Nature Communications, 2023, 14(1): 2342.