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HepG2細(xì)胞培養(yǎng)攻略

2023-03-02 17:24 作者:愛(ài)必信_(tái)absin  | 我要投稿

HepG2 細(xì)胞是來(lái)源于一個(gè)15歲白人的肝癌組織;分泌多種血漿蛋白:清蛋白、α2-巨球蛋白、血纖維蛋白溶酶原、轉(zhuǎn)鐵蛋白等;模式染色體數(shù)為55;該細(xì)胞在免疫抑制小鼠中不致瘤;是一個(gè)合適的轉(zhuǎn)染宿主;表達(dá)標(biāo)志物包括胰島素受體;胰島素樣生長(zhǎng)因子 II (IGF II)受體。呈上皮樣;貼壁,傳代比例 1:4 - 1:6;營(yíng)養(yǎng)體系是MEM+10% FBS。


圖1 HepG2 人肝癌細(xì)胞

首先我們討論的是HepG2長(zhǎng)得怎么才算好呢?相比于其它細(xì)胞,HepG2長(zhǎng)得相對(duì)ugly一些,這個(gè)細(xì)胞狀態(tài)好的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)有哪些?我們來(lái)看一組對(duì)比(圖3和圖4)。


差的細(xì)胞特點(diǎn):細(xì)胞裂解,背景臟;

好的細(xì)胞特點(diǎn):細(xì)胞克隆成島狀,背景干凈,對(duì)比是很鮮明的。



接下來(lái)我們討論一下HepG2細(xì)胞消化問(wèn)題。在體外培養(yǎng)時(shí),該細(xì)胞容易聚團(tuán)呈島狀(如圖4所示),且如果長(zhǎng)得過(guò)滿,輕度消化就成片下來(lái),容易成團(tuán)。


圖4 HepG2細(xì)胞聚團(tuán)增殖成呈島狀分布

傳代時(shí),怎樣才能使HepG2消化成單個(gè)細(xì)胞?

有兩種解決辦法:

※ 融合率達(dá)到80%即可傳代,長(zhǎng)太滿容易成片脫落;

※ 先用胰酶消化約3分鐘,用完培終止消化作用,然后用移液管將細(xì)胞懸液吸起,將管口稍微用力按在培養(yǎng)瓶底部,用力快速將細(xì)胞懸液擠出(可重復(fù)一次),可有效減輕細(xì)胞聚團(tuán)。

HepG2是最為常用肝癌細(xì)胞系之一,主要用于肝臟研究。

肝炎病毒研究:HepG2是常用的研究HBV和HCV細(xì)胞系模型,利用CRISPR/Cas9構(gòu)建基因敲除HepG2的HBV感染細(xì)胞模型細(xì)胞,為徹底治愈乙肝提供新思路。體外肝癌(HCC)模型:HepG2中p53抑癌基因無(wú)突變,因此可用于研究p53與肝細(xì)胞癌(HCC)的密切關(guān)系,以及HCC的發(fā)病、診治、預(yù)防。

藥物研究:肝臟是人體內(nèi)藥物代謝的最主要器官,也是重要的解毒器官。HepG2細(xì)胞系無(wú)論在形態(tài)上還是功能上都更接近于人的肝組織,該細(xì)胞系常用于藥物代謝和肝毒性研究。

本期講解就到這里了,下一期您想了解哪種細(xì)胞的培養(yǎng)攻略呢?歡迎留言評(píng)論哦。如有細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題,歡迎掃碼加入我們微信群哦。

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