喵喵 | 2-6 單克隆抗體制備

1??原理基礎題

2022·山東

如圖所示，將由2種不同的抗原分別制備的單克隆抗體分子，在體外解偶聯(lián)后重新偶聯(lián)可制備雙特異性抗體，簡稱雙抗。下列說法錯誤的是

A. 雙抗可同時與2種抗原結合

B. 利用雙抗可以將蛋白類藥物運送至靶細胞

C. 篩選雙抗時需使用制備單克隆抗體時所使用的2種抗原

D. 同時注射2種抗原可刺激B細胞分化為產雙抗的漿細胞【漿細胞只能產生1種抗體】

2020·北京

人體感染新冠病毒后，機體會產生多種特異性抗體。我國科學家從康復者的漿細胞中克隆出針對病毒表面抗原的抗體基因相關序列，構建表達載體并在相應系統(tǒng)中表達，可制備出全人源單克隆抗體。以下表述錯誤的是

A. 該單抗可直接用于新冠病毒的核酸檢測【單抗找的是抗原，沒有辦法跟核酸結合】

B. 在該單抗制備過程中利用了基因工程技術

C. 該單抗可與新冠病毒相應蛋白特異性結合

D. 可用抗原–抗體反應檢測抗體基因表達產物

2021·山東

一個抗原往往有多個不同的抗原決定簇，一個抗原決定簇只能刺激機體產生一種抗體，由同一抗原刺激產生的不同抗體統(tǒng)稱為多抗。將非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72注入小鼠體內，可利用該小鼠的免疫細胞制備抗p72的單抗，也可以從該小鼠的血清中直接分離出多抗。下列說法正確的是

A. 注入小鼠體內的抗原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響大【??；多抗如果抗原純度低，就纏在多抗里。單抗需要多次提取】

B. 單抗制備過程中通常將分離出的漿細胞與骨髓瘤細胞融合【多種B淋巴細胞】

C. 利用該小鼠只能制備出一種抗p72的單抗【很多種單抗】

D. p72部分結構改變后會出現(xiàn)原單抗失效而多抗仍有效的情況?

2??兩次篩選題型

2017秋·東城區(qū)期末

若用a表示骨髓瘤細胞，b表示B淋巴細胞，則單克隆抗體制備過程中的兩次篩選可表示為

A. A

B. B

C. C

D. D?

2022春·浦口區(qū)校級期中

如圖，核苷酸合成有兩個途徑，物質A可以阻斷其中的全合成途徑。正常細胞內含有補救合成途徑所必需的轉化酶和激酶。制備單克隆抗體時選用的骨髓瘤細胞缺乏轉化酶?，F(xiàn)用加入H、A、T三種物質的“HAT培養(yǎng)基”來篩選特定的雜交瘤細胞。下列關于篩選原理的敘述，正確的是

A. 免疫的B淋巴細胞及其相互融合細胞因全合成途徑被A阻斷，在HAT培養(yǎng)基上不能增殖【通過補救合成路徑增殖】

B. 骨髓瘤細胞及其相互融合細胞因無法進行上述兩個途徑，而在HAT培養(yǎng)基上不能增殖?

C. 雜交瘤細胞因為可進行上述兩個途徑，能在HAT培養(yǎng)基上大量增殖【雜交瘤細胞加入A，被阻斷了，只能進行下面的途徑】

D. HAT培養(yǎng)基上篩選出的所有雜交瘤細胞，既能大量增殖又能產生較高純度的目標抗體【得到了多克隆抗體，還要進行第二次篩選】

3??綜合大題

2020·新課標Ⅰ

為研制抗病毒A的單克隆抗體，某同學以小鼠甲為實驗材料設計了以下實驗流程。

回答下列問題：

（1）上述實驗前必須給小鼠甲注射病毒A，該處理的目的是注射抗原，促進小鼠產生具有特異性的B淋巴細胞。

（2）寫出以小鼠甲的脾臟為材料制備單細胞懸液的主要實驗步驟：從小鼠甲內抽取脾臟，剪碎，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理一段時間。

（3）為了得到能產生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞，需要進行篩選。圖中篩選1所采用的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，使用該培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)的結果是篩選出由B淋巴細胞和骨髓瘤細胞的雜交瘤細胞。圖中篩選2含多次篩選，篩選所依據的基本原理是抗體-抗原特異性結合。

（4）若要使能產生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞大量增殖，可采用的方法有將雜交瘤細胞注入小鼠細胞腹腔進行培養(yǎng)或在體外進行大規(guī)模培養(yǎng)。

2020·江蘇

新型冠狀病毒可通過表面的刺突蛋白（S蛋白）與人呼吸道黏膜上皮細胞的ACE2受體結合，侵入人體，引起肺炎。圖1為病毒侵入后，人體內發(fā)生的部分免疫反應示意圖。單克隆抗體可阻斷病毒的粘附或入侵，故抗體藥物的研發(fā)已成為治療新冠肺炎的研究熱點之一。圖2為篩選、制備抗S蛋白單克隆抗體的示意圖。請據圖回答下列問題：

（1）圖1中人體內抗原遞呈細胞吞噬病毒,并將病毒的抗原暴露在細胞表面，被T細胞表面的受體識別后激活該細胞。

（2）B細胞識別入侵的病毒后，在淋巴因子作用下，經過細胞的增值、分化，形成漿細胞和記憶細胞。

（3）為判斷疑似患者是否為新型冠狀病毒感染者，采集鼻咽拭子主要用于病原學檢查，檢測病毒的核酸；采集血液樣本主要用于血清學檢查，檢測抗新型冠狀病毒抗體。

（4）據圖2所示，研制抗S蛋白單克隆抗體，需先注射刺突蛋白（或S蛋白）免疫小鼠以激活小鼠的免疫細胞，再提取激活的B細胞與骨髓瘤細胞融合，用HAT培養(yǎng)基篩選獲得雜交瘤細胞。因為同一種抗原可能激活多種B細胞，還需繼續(xù)篩選才能獲得分泌單克隆抗體的細胞株。

2021·湖南

M基因編碼的M蛋白在動物A的肝細胞中特異性表達?，F(xiàn)設計實驗，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術獲得M基因失活的轉基因克隆動物A，流程如圖所示。回答下列問題：

（1）在構建含有片段F的重組質粒過程中，切割質粒DNA 的工具酶是限制酶，這類酶能將特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。

（2）在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進行動物A成纖維細胞的原代和傳代培養(yǎng)時，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是清除代謝雜物，防止細胞代謝產物積累對細胞自身造成危害，及時補充營養(yǎng)物質。

（3）與胚胎細胞核移植技術相比，體細胞核移植技術的成功率更低，原因是動物胚胎細胞分化程度低，恢復其全能性相對容易，動物體細胞分化程度高，恢復其全能性十分困難。從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細胞，在形態(tài)上表現(xiàn)為細胞體積小，細胞核大，核仁明顯，功能上具有發(fā)育的全能性。

（4）鑒定轉基因動物：以免疫小鼠的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行融合，篩選融合雜種細胞，制備M蛋白的單克隆抗體。簡要寫出利用此抗體確定克隆動物A中M基因是否失活的實驗思路：取克隆動物A的肝臟細胞，提取蛋白質，與M蛋白的單克隆抗體進行抗原-抗體雜交，若出現(xiàn)凝集反應，則說明M基因未失活，反之則失活。