海豚鏈球菌是一種世界性分布的致病菌，高溫期易流行，感染宿主廣、傳染性強、死亡率高，危害嚴(yán)重。海豚鏈球菌可以引起魚類患鏈球菌病，也會影響人類健康，是一種人畜共患病的致病菌。感染魚可呈嗜神經(jīng)組織癥狀，發(fā)病魚體色發(fā)黑，體表粘液增多，游動緩慢或靜止，有時旋轉(zhuǎn)游泳后沉于水底；最明顯的癥狀是眼球突出，鰓蓋內(nèi)側(cè)發(fā)紅和出血。雖然魚類感染后具有較為明顯的臨床癥狀，但由于菌株分型復(fù)雜，誘發(fā)因素復(fù)雜，致病特點、毒力強弱均有所不同，還需對其病因進行更進一步的判別、確診。目前主要用選擇培養(yǎng)基篩選、微生物學(xué)、分子生物學(xué)及免疫學(xué)等檢測技術(shù)進行診斷，以便對癥施治。在疾病防治方面，多使用抗生素進行治療，但會出現(xiàn)抗藥性和藥物殘留問題；因此，研制疫苗是有效應(yīng)對疾病的發(fā)生和流行的手段之一；近些年，中草藥具有抑菌、抗菌效果，因來源廣泛、價格低廉、毒副作用小等特點，引起研究人員的關(guān)注。

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關(guān)鍵詞：海豚鏈球菌；臨床癥狀；檢測技術(shù)；疾病預(yù)防；疫苗

一、海豚鏈球菌概述

海豚鏈球菌(Streptococcus iniae)最初由Pier等[1]自亞馬遜淡水海豚化膿病灶分離得到，因此被命名為海豚鏈球菌。隨后該菌便在北美洲、中東、亞太地區(qū)以及歐洲蔓延開來，主要感染淡水和海水魚[2—4]。海豚鏈球菌能引起多種野生和養(yǎng)殖經(jīng)濟魚類患鏈球菌病，是鏈球菌病的主要病原之一，可引起大批量魚類死亡，給世界水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失[5]，而且海豚鏈球菌已經(jīng)威脅到人類的健康與安全，目前已有多例人因接觸病魚而感染的報道。

海豚鏈球菌菌株分型復(fù)雜，具有scpI、simA、cpsD、sagA、pdi、pgm 和 cfi 等多種毒力因子[6-7]，因此致病性具有差異性。海豚鏈球菌隸屬于鏈球菌科、鏈球菌屬，呈圓形或卵圓形，二鏈或鏈鎖狀的球菌，無運動力，有莢膜，革蘭氏陽性，兼性厭氧，具有感染宿主廣、傳染性強、死亡率高等特點。海豚鏈球菌發(fā)育的溫度范圍為10-45℃，最適溫度為20-37℃。發(fā)育的鹽度范圍為0-70，最適鹽度為0。發(fā)育的pH為3.5-10，最適pH為7.6。

海豚鏈球菌是一種條件性人畜共患病病原菌，它不僅能感染幾乎所有淡、海水魚類，還可以感染人，引起局部蜂窩組織炎，心內(nèi)膜炎[8]。目前主要用微生物學(xué)、分子生物學(xué)及免疫學(xué)等檢測技術(shù)進行診斷，以便對癥施治。

二、流行病學(xué)和臨床癥狀

1、流行病學(xué)：

目前，魚類海豚鏈球菌病在主要魚類養(yǎng)殖國家均有發(fā)生，但溫帶和熱帶、亞熱帶地區(qū)尤其嚴(yán)重。根據(jù)國內(nèi)外相關(guān)報道顯示，海豚鏈球菌可感染30余種魚類，致其發(fā)?。?］。鏈球菌病全年均可發(fā)生，但7-9月高溫期容易流行，水溫降至20℃以下時則較少，在日本全國流行，危害較大。鏈球菌有時會與其他病原性細(xì)菌形成混合感染，造成嚴(yán)重危害。

鏈球菌為典型的條件致病菌，平常生存于養(yǎng)殖水體及底泥中。在富營養(yǎng)化或養(yǎng)殖自身污染較為嚴(yán)重的水域中，此菌能長期生存，當(dāng)養(yǎng)殖魚體抵抗力降低時，易引起疾病。該病的發(fā)生與養(yǎng)殖密度大、換水率低、餌料鮮度差及投餌量大密切相關(guān)。體表損傷、水環(huán)境條件惡劣等常是導(dǎo)致魚類感染發(fā)病的重要因素［10］。

傳播途徑：鏈球菌通過水體、攝餌或接觸等方式侵染魚體，但臨床發(fā)病尚未明確是由哪種具體方式引起；魚類的相互感染表現(xiàn)為個體之間的水平傳播，對于親本之間的垂直傳播暫未發(fā)現(xiàn)。其自然感染通過口腔與人工感染有腹腔、肌肉注射或鼻、鰓接種。

2、臨床癥狀：

2.1魚感染海豚鏈球菌

從上世紀(jì)80年代起，海豚鏈球菌感染了日本、新加坡、以色列等地，為降低經(jīng)濟損失，以色列率先實行了羅非魚的疫苗應(yīng)用計劃［11］，然而在短期的療效后，大批海豚鏈球菌感染重新爆發(fā)，新分離株與之前的海豚鏈球菌毒株生化特性存在差異，病理損傷上也表現(xiàn)出新變化［12］。海豚鏈球菌感染的臨床癥狀分為急性和亞急性型，主要表現(xiàn)癥狀為魚類的腦膜腦炎。急性感染的魚類常出現(xiàn)爆發(fā)性死亡，但無典型癥狀［13］。亞急性感染的病魚常出現(xiàn)體色發(fā)黑、吻端發(fā)紅、食欲減退、嗜睡、單側(cè)或雙側(cè)眼球突出、角膜混濁；鰓蓋下緣、胸鰭基部、體表的其他部位有出血現(xiàn)象（圖1a）；鰭條邊緣褪色、肛門紅腫，腹水（圖1b）；池邊離群漫游，間歇螺旋狀或旋轉(zhuǎn)游動，泳姿不平衡，脊骨呈“C”形或逗號樣彎曲，死前出現(xiàn)間斷性狂游、翻滾或轉(zhuǎn)圈等癥狀［14］。有些病魚腦部充血，腹腔有血色腹水，肝、脾、腎等臟器充血腫脹、變色，嚴(yán)重者肝臟和腎臟糜爛。

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并非所有魚類感染海豚鏈球菌都會出現(xiàn)癥狀， Bromage等（1999）從眼觀健康的肺魚大腦分離到了細(xì)菌，結(jié)果證實，可以在無病原癥狀的情況下攜帶細(xì)菌。

2.2人感染海豚鏈球菌

研究發(fā)現(xiàn)，在有外傷的情況下接觸帶菌魚和易感魚類后，很容易感染鏈球菌。主要感染癥狀為手的蜂窩織炎，并伴有發(fā)熱反應(yīng)。近年來，隨著研究的深入，人感染海豚鏈球菌主要表現(xiàn)為菌血癥、蜂窩織炎、腦膜炎和關(guān)節(jié)炎[15]。

三、檢測技術(shù)

1、使用選擇培養(yǎng)基篩選

選擇培養(yǎng)基是根據(jù)海豚鏈球菌對不同抗菌物質(zhì)的耐受性，選擇合適的抗菌物質(zhì)來抑制其他菌的生長，進而從養(yǎng)殖水體或病魚中檢出海豚鏈球菌。Nguyen等設(shè)計了醋酸鉈—噁喹酸和硫酸黏桿菌素—噁喹酸兩種選擇性培養(yǎng)基，將其應(yīng)用于褐牙鲆海豚鏈球菌的分離。而后Nguyen等將培養(yǎng)基配方進行了改良，以Todd-Hewitt肉湯代替腦心浸液作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，硫酸黏桿菌素—噁喹酸培養(yǎng)基中加入醋酸鉈0.5g/L，并將其用于日本褐牙鲆養(yǎng)殖場的海豚鏈球菌的調(diào)查,發(fā)現(xiàn)醋酸鉈—硫酸黏桿菌—噁喹酸培養(yǎng)基比硫酸黏桿菌素—噁喹酸培養(yǎng)基對雜菌的抑制效果更好［9］。

2、微生物學(xué)檢測技術(shù)

微生物學(xué)檢測技術(shù)主要是從病魚的腦、心臟、腎臟、脾臟或肝臟中取樣，通過培養(yǎng)、分離，對典型菌落的形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、生化特性、致病特性、對藥物的敏感性等進行試驗，以明確致病原?，F(xiàn)已開發(fā)出商品化的生化鑒定試劑盒可進行無乳鏈球菌、海豚鏈球菌等的鑒定，專屬性較強，操作方便，大大縮短診斷時間。

海豚鏈球菌在10℃生長，45℃不生長；接觸酶陰性；可水解七葉靈和精氨酸，Ｖ－Ｐ試驗和馬脲酸試驗陰性等。微生物鑒定系統(tǒng)能夠自動測定多種生化反應(yīng)，依據(jù)其自帶的數(shù)據(jù)庫進行鑒定后輸出結(jié)果。

早期對海豚鏈球菌的鑒定主要依賴于分離菌株的生理生化特性及臨床癥狀。但海豚鏈球菌不同的地理株系在生化特性上存在差異，不同株的水解酶活性不同。由于海豚鏈球菌定種較晚，很多商品化的生化鑒定系統(tǒng)并沒有將該菌列入其中，而Biolog GP生化鑒定系統(tǒng)不能完全正確鑒定出全部海豚鏈球菌菌株。生化試驗是檢測海豚鏈球菌的主要手段，但其過程大約需要 1～2 d[16]，僅用生化鑒定的方法鑒定海豚鏈球菌極不可靠。

3、分子生物學(xué)檢測技術(shù)

分子鑒定具有快速、簡便以及靈敏度高的優(yōu)點，是微生物鑒定的發(fā)展趨勢。分子生物學(xué)檢測技術(shù)，目前主要有基于通用引物的16S rRNA序列分析技術(shù)、靶向于某些編碼基因的特異性PCR診斷方法和核酸雜交技術(shù)等。采用傳統(tǒng)的16S rRNA基因進行鑒定，對于親緣關(guān)系較近的細(xì)菌常因分辨率不夠而較難區(qū)分[17]。以提取的分離菌株基因組DNA為模板擴增細(xì)菌16S rRNA基因及海豚鏈球菌lct O基因[18]，擴增產(chǎn)物經(jīng)１％的瓊脂糖凝膠電泳檢測后送至公司進行測序。測序結(jié)果在NCBI上BLAST比對分析，確定該分離菌株的種類。

多重PCR法是常用的鑒定方法，即在同一反應(yīng)體系中加入多對引物，擴增同一模板或不同模板的特定區(qū)域，因此具有高效、快捷、特異、敏感和低成本等優(yōu)點。

PCR、核型分型、RAPD和 PFGE等也可用于海豚鏈球菌檢測，然而這些方法也比較耗時，并且可能由于檢測過程中多次添加試劑而導(dǎo)致

污染。環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)（Loop－mediated isothermal amplification，LAMP）作為一種敏感、快捷、低成本的檢測方法，其擴增可在1h內(nèi)完成，通過熒光染料的濁度或顏色變化即可檢測產(chǎn)物，檢測時間大幅縮短。有研究建立了1種基于海豚鏈球菌Sim基因檢測的高效、敏感的LAMP檢測方法，并對部分魚類海豚鏈球菌的感染狀況進行了檢測。LAMP檢測靈敏度研究結(jié)果顯示，LAMP對海豚鏈球菌DNA檢測的最低濃度為 5.32拷貝/μL(圖2)。PCR 檢 測 結(jié) 果 顯 示， 其 檢 測 的 最 低 濃 度 為 5.32×102 拷貝/μL（圖 3）[19]。

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4、免疫學(xué)檢測技術(shù)?

免疫性檢測技術(shù)主要是基于抗體能特異性地識別、結(jié)合相應(yīng)的抗原，包括雙抗夾心法、間接法、競爭法、捕獲包被法、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等，其中以 ELISA為代表的免疫學(xué)檢測技術(shù)是目前檢測魚類鏈球菌較常用的手段。陳善真等制備純化羅非魚無乳鏈球菌特異性IgM和兔抗羅非魚無乳鏈球菌Ig的IgG，利用原核表達(dá)純化的無乳鏈球菌ScpB蛋白質(zhì)作為包被抗原，建立檢測無乳鏈球菌特異性IgM抗體的ELISA方法，結(jié)果表明，該方法僅能夠特異性地檢測羅非魚的血清抗體，而與其他魚類的血清抗體無交叉反應(yīng)，特異性良好，其敏感性為 1∶800；同時抗體水平的變化與相對免疫保護率變化具有正相關(guān)性。

Klesius等篩選了一個對海豚鏈球菌特異的單克隆抗體，并利用該單抗建立了一種專門診斷海豚鏈球菌的間接免疫熒光抗體技術(shù)，利用該技術(shù)，能夠成功地對實驗或自然條件下的海豚鏈球菌感染進行診斷。該技術(shù)具有較好的特異性，能夠較好的將海豚鏈球菌的感染與其他細(xì)菌分辨開來。

四、防治

魚類鏈球菌病的發(fā)生是由環(huán)境因素、魚體抵抗力和病原菌共同作用的結(jié)果，對于鏈球菌病的防治，主要使用改善水體養(yǎng)殖環(huán)境、免疫預(yù)防和藥物治療等方法。

1、疾病預(yù)防

Aruety等［20］研究設(shè)計了零排放循環(huán)水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)的污泥消化器，降低污泥中病原菌的含量。Iwashita等［21］通過在飼料中添加微生態(tài)制劑增強羅非魚魚苗的免疫力，提高了羅非魚對海豚鏈球菌和嗜水氣單胞菌的抵抗力，Shiau等［22］則通過在低魚粉和高豆粕的飼料中補充核苷酸，提高了羅非魚對海豚鏈球菌的免 疫力。

接種疫苗是預(yù)防鏈球菌病的有效方法。目前關(guān)于海豚鏈球菌疫苗的研究主要有滅活疫苗、減毒疫苗、亞單位疫苗和DNA疫苗。Eldar等［23］利用福爾馬林滅活疫苗免疫虹鱒，使得由海豚鏈球菌引起的虹鱒的死亡率由50%降至5%。張生等［8］利用自患病羅非魚分離到的海豚鏈球菌菌株制備的滅活疫苗，通過腹腔注射免疫尼羅羅非魚，使用8倍半數(shù)致死量的劑量攻毒獲得100%的相對保護率。Locke［25］將編碼毒力因子M蛋白的simＡ基因敲除，構(gòu)建了一株simＡ突變菌株，使該菌株的毒力大大減弱，對條紋鱸和斑馬魚均顯示出較好的保護效應(yīng)。有一些研究人員研究出針對海豚鏈球菌的烯醇化酶亞單位疫苗，也有一些研究者構(gòu)建了一個針對海豚鏈球菌的DNA疫苗。

2、藥物治療

魚類海豚鏈球菌病的治療，目前主要使用抗菌藥物和中草藥。

藥敏試驗結(jié)果顯示，海豚鏈球菌對恩諾沙星、諾氟沙星、頭孢噻肟、頭孢拉定、頭孢唑啉、卡那霉素、強力霉素、依諾沙星、紅霉素、鏈霉素、四環(huán)素、阿奇霉素、環(huán)丙沙星等藥物較為敏感，可用于海豚鏈球菌的治療。

相關(guān)研究表明，中草藥對細(xì)菌性疾病的防治有積極的效果，中草藥通過多靶點機制抑制病原菌生長或殺死病原，常見的作用機制為中草藥及其有效成分通過抑制病原菌肽聚糖及細(xì)胞壁的合成，使細(xì)胞壁裂解；抑制菌體蛋白質(zhì)的合成使細(xì)菌死亡；干擾菌體的酶系，抑制酶的活性，使菌體的新陳代謝發(fā)生紊亂而死亡；

抑制細(xì)菌的呼吸代謝，使病原菌無法完成正常的呼吸代謝而死亡[26]。吳穎瑞等[27] 研究表明，羅非魚源海豚鏈球菌對羌活低度敏感，而黃芩、連翹、白芷、倉術(shù)對羅非魚海豚鏈球菌無抑菌效果。張彬等研究發(fā)現(xiàn)，黃連、黃芩、大黃和黃柏對海豚鏈球菌的抑制作用較強；同時黃柏與黃連、大黃與黃芩聯(lián)用抗菌作用增強，大黃與黃連聯(lián)用不變，而黃柏與黃芩、黃柏與大黃、黃芩與黃連聯(lián)用抑菌能力降低[28]。

藥物通過合理的配伍組成方劑，可以增強或改變其原來的功用，并調(diào)其偏勝，制其毒性，消除或緩解其對機體不良反應(yīng)，發(fā)揮藥物間相輔相成或相反相成等綜合作用，使各具特性的藥物組合成一個整體，從而發(fā)揮更好的預(yù)防與治療效果[29]。

五、總結(jié)與展望

海豚鏈球菌是一種世界性分布的致病菌，每年都會造成巨大的經(jīng)濟損失。防止魚類海豚鏈球菌病的發(fā)生，首先要探明海豚鏈球菌的傳播途徑和致病機制，目前海豚鏈球菌的致病機理還僅限于對部分毒力因子的研究，有關(guān)致病機制還有待深入研究。海豚鏈球菌病的治療，目前主要使用抗菌藥物，由于抗生素的使用存在許多問題，人們已將防治焦點聚集在疫苗的研發(fā)和使用上，并且逐步成為漁業(yè)水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域有效預(yù)防傳染性疾病的重要途徑。盡管目前對鏈球菌疫苗的研究越來越多，但是上市產(chǎn)品仍較少，大部分處于試驗階段，臨床效果還有待檢驗。中草藥具有抑菌、抗菌的效果，而且具備來源廣泛、價格低廉、毒副作用小、藥物殘留少、無耐藥性等特點，因此備受養(yǎng)殖企業(yè)和科研人員的關(guān)注，但其對病原菌的抑菌機理目前尚未明了，有待于進一步證實。

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注：轉(zhuǎn)載自wx公眾號“水生動物健康評估”（已獲得作者的轉(zhuǎn)載許可）