N-3芘NEM標記巰基標記紅細胞膜蛋白/DiD perchlorate(細胞膜紅色熒光探針)的研究制備
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N-(3芘)馬來酰亞胺(N-3芘 NEM)是一種特異標記蛋白質(zhì)巰基的熒光探針,可通過熒光強度測定巰基含量.本文用不同濃度的高鐵卟啉處理紅細胞膜,再用N-3芘 NEM 標記,發(fā)現(xiàn)隨濃度加大,巰基含量減少,與化學法測定結(jié)果一致,說明高鐵卟啉可使膜蛋白巰基交聯(lián).用 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法做 N-3芘 NEM 標記的紅細胞膜,通過熒光掃描確定 N-3芘 NEM 與紅細胞膜區(qū)帶1,2及3結(jié)合。
3.N-3芘 NEM 熒光探針標記紅細胞膜分別取o.D 為0.1, 0.5,1.0及2.0高鐵嚇啉化合物0.5ml,用氮氣吹干,加50pul甲醇溶解,然后分別加入2mg 蛋白/ ml 的紅細胞膜0.5ml ,加0.5mg%的N-3芘NEM 2ml,以不加高鐵葉琳化合物的紅細胞膜為對照,37℃保溫2小時,保溫后用Hepes 緩沖液洗2次,在日立850熒光分光光度計上掃描。
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RXYWX.2022.5.20