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無外泌體胎牛血清在外泌體研究中的應(yīng)用

2023-07-27 10:06 作者:愛必信_absin  | 我要投稿

外泌體(Exosomes)是一種能被機體內(nèi)大多數(shù)細胞分泌的直徑大約為30-150nm的微小膜泡,在體液中廣泛存在,外泌體攜帶和傳遞重要的信號分子,參與細胞活動的重要調(diào)控。

圖1 外泌體示意圖(圖片來源于網(wǎng)絡(luò),僅供學(xué)習(xí)參考用)

2013年美國科學(xué)家Rothman、Schekmam以及德國科學(xué)家Sudhof因發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)部外泌體合成運輸調(diào)控機制聯(lián)合獲得了諾貝爾生理學(xué)與醫(yī)學(xué)獎,他們的發(fā)現(xiàn)使外泌體的研究到達了全新的高度。截止2023年7月,全球共有118個國家科研工作者從事外泌體研究,相關(guān)文章發(fā)表趨勢逐年攀升。

圖2 外泌體研究現(xiàn)狀

外泌體作為干細胞分泌的囊泡,攜帶有來自干細胞的某些蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA及RNA等生物活性物質(zhì),干細胞所分泌的外泌體具有抗炎、抗細胞凋亡、促進細胞再生等作用,作為無細胞治療的新寵,外泌體有免疫原性低,更穩(wěn)定,更好保存,易于質(zhì)控的優(yōu)勢。


外泌體提取方法:差速離心法、密度梯度離心、超濾離心、磁珠免疫法、PEG-base沉淀法、色譜法以及試劑盒抽提法,這些試劑盒不需要特殊設(shè)備,隨著產(chǎn)品技術(shù)的提升,提取效率和純化效果逐漸提高,因而逐漸取代超速離心法并推廣開來。

外泌體的常用鑒定方法有三種:透射電鏡法、納米顆粒跟蹤分析法及分子標(biāo)志物檢測(至少3個陽性標(biāo)志物、1個陰性標(biāo)志物)。


圖3 外泌體鑒定圖(圖片來源于網(wǎng)絡(luò),僅供學(xué)習(xí)參考用)

外泌體幾乎可以與任何疾病相關(guān)聯(lián),成為疾病標(biāo)志物、疾病機理、藥物開發(fā)等研究的創(chuàng)新熱點。目前clinicaltrials.gov中有關(guān)外泌體的臨床試驗研究共163項,主要涉及各種癌癥、皮膚損傷、抗衰老、多囊卵巢綜合征、干眼癥等相關(guān)研究。


在外泌體研究中,如果使用胎牛血清培養(yǎng)細胞、通過收集上清液來提取外泌體進行后續(xù)實驗,胎牛血清中的牛源外泌體會對實驗分析造成極大的干擾。無外泌體血清應(yīng)運而生。愛必信無外泌體血清abs993專為外泌體研究而設(shè)計,無菌采集健康胎牛血清過濾而成,去除97%以上的血清內(nèi)源外泌體。具有無支原體,低內(nèi)毒素等特點。

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切勿直接將血清從-20°C進入37°C解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀,置于2-8℃融化,然后再室溫下使之全融,解凍過程中應(yīng)輕輕的搖晃均勻。血清在解凍過程中可能會出現(xiàn)少量絮狀或片狀析出物(鏡檢形狀類似小黑點),主要是血清中脂蛋白的變形或是纖維蛋白析出,并不影響血清本身的質(zhì)量,可使用0.45um過濾器過濾即可。


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