位于線粒體基質的檸檬酸合成酶是線粒體中的限速酶檸檬酸循環(huán)（或克雷布斯循環(huán)）的第一步。檸檬酸合成酶催化乙酰輔酶A和草酰乙酸的乙酸殘基形成檸檬酸鹽。醋酸氧芐酯在完成一輪克雷布斯循環(huán)后再生。酶活性用于評估線粒體的氧化能力以及線粒體的完整性。

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檸檬酸合成酶可以通過以下方式測量從CoA-SH釋放的-SH基團的形成使用反應性埃爾曼試劑（5,5'-二硫代雙[2-硝基苯甲酸]，DTNB）并監(jiān)測吸光度在412納米處。

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艾美捷Detroit R&D?檸檬酸鹽合酶測定組分如下：?

?96孔板。

?提取緩沖液。

?反應緩沖液。

?DTNB混合。

?乙酰輔酶A

?氧鹵乙酸鹽混合物

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樣品制備：

?硬組織：在刀式勻漿器（Polytron、Turrax或快速超聲處理）中以每克組織4毫升提取緩沖液的比例，并在4°C下以1000克離心15分鐘。收集上清液，測量蛋白質（最佳濃度約為0.5 mg/ml）。

?細胞：在Potter Elvehjem中超聲或均質。在4°C下以1000g離心10分鐘，收集上清液，測量蛋白質（準確濃度約為0.5mg/ml）。

?富含線粒體的部分：由于92%的檸檬酸合成酶活性位于線粒體和乙酰輔酶A不能穿透其中，可以通過分離線粒體來制備（提高產(chǎn)量）并將其分解。用線粒體勻漿對樣品進行勻漿緩沖液（250mM蔗糖、2mM乙二胺四乙酸（EDTA）和25mM Tris-HCl，pH 7.4）加蛋白酶抑制劑。在4oC下以800g離心10分鐘。仔細收集上清液（丟棄顆粒），并在4oC下以15.000-20.000 x g離心20分鐘。通過添加清洗顆粒PBS，離心15.000-20.000 x g，離心5分鐘。用提取緩沖液重新懸浮顆粒。

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試劑制備：

?解凍所有試劑。

?在DTNB混合管中加入985μl反應緩沖液（在冰上穩(wěn)定一天）。

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含量測定（415 nm，37℃）：

? 20ml樣品（總蛋白質范圍5-20μg/ml）

?10μl反應緩沖液

? 5 m乙酰輔酶A的l

? 15ml樣品緩沖液

?增加100ml至板材坯料

?混合10秒，在37oC下孵育1分鐘。

?增加50ml草酰乙酸鹽混合物，快速混合5秒，在3-8分鐘內讀取。

反應空白-添加提取緩沖液代替反應緩沖液中的樣品以及乙酰輔酶A和草酰乙酸混合樣品（除ELISA板空白外）應從樣品中扣除該活性價值觀

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Detroit R&D?檸檬酸鹽合酶測定文獻引用：

[1] PA Srere.Citrate synthase.Methods Enzymol., 13:3-11, 1969.

[2] D Shepherd & PB Garland.Citrate synthase from rat liver. Methods Enzymol., 13:11-16, 1969.

[3] E Bogin & A Wallace.Citrate synthase from lemon fruit. Methods Enzymol., 13:19-22, 1969.

[4] J. Santos et al. Free Radical Biology and Medicine 51: 1849-1860, 2011

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Detroit R&D專注于心血管疾病、癌癥的研究，診斷和治療領域。涉及環(huán)境健康科學、高血壓、乳腺癌和前列腺癌相關研究領域。艾美捷科技是Detroit R&D的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質的產(chǎn)品與服務。