基于磁性分離生物大分子的技術(shù)自上世紀(jì)70年代誕生以來，在生物醫(yī)藥領(lǐng)域?qū)崿F(xiàn)了快速和廣泛的應(yīng)用。它具備操作簡單、適應(yīng)性強(qiáng)、可手動(dòng)操作以及適用于儀器自動(dòng)化處理等優(yōu)點(diǎn)。生物分離磁珠是含有生物功能分子的磁性顆粒，具有人工合成磁珠無法比擬的優(yōu)勢(shì)。利用基因工程技術(shù)或結(jié)合化學(xué)修飾技術(shù)，可在生物磁珠表面定向修飾特殊生物功能分子，如經(jīng)過抗原或抗體分子修飾的磁珠，這又可稱為免疫磁珠。免疫磁珠在生化分析和免疫檢測(cè)中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。最常見的作用為免疫磁珠法細(xì)胞分選，這是結(jié)合磁力學(xué)、免疫學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等技術(shù)，為細(xì)胞的分離純化和激活打開了新思路。

細(xì)胞分選

細(xì)胞分選，也被稱為細(xì)胞的分離純化，即對(duì)樣本中的目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行分離和富集，在醫(yī)學(xué)診斷、治療和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究中均具有重要作用。細(xì)胞分選方法總體上可分為三種：基于細(xì)胞培養(yǎng)特性的分選技術(shù)、基于細(xì)胞物理性能的分選技術(shù)和基于生化親和力的細(xì)胞分選技術(shù)。磁珠分離純化細(xì)胞的分選方法則屬于基于生化親和力的細(xì)胞分選技術(shù)。該方法操作簡單，可在較短時(shí)間內(nèi)獲得高純度的靶細(xì)胞，且無需大型儀器，因此成為當(dāng)前細(xì)胞分選中較為常用的方法之一。

磁性細(xì)胞分選是用結(jié)合有抗體的免疫磁珠與樣品細(xì)胞進(jìn)行孵育，表達(dá)有相應(yīng)抗原的細(xì)胞就會(huì)特異地結(jié)合在包被有抗體的免疫磁性微粒上。

當(dāng)混合體系緩慢地經(jīng)過磁場(chǎng)時(shí)，帶有磁珠的細(xì)胞就會(huì)滯留在磁珠上，而非目的細(xì)胞由于未結(jié)合磁珠仍存在與混合細(xì)胞懸液中，從而達(dá)到分離、純化細(xì)胞的目的。MACS法是一種相對(duì)高效、簡便的細(xì)胞分選方法，所需設(shè)備簡單，只需一塊專用磁鐵即可進(jìn)行分選，操作較為簡單，對(duì)操作人員的技術(shù)要求也不高，一般實(shí)驗(yàn)室都可進(jìn)行磁性分選。

磁性分選只是讓細(xì)胞處于一個(gè)低磁場(chǎng)中，基本可以忽略對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的影響。分離得到的細(xì)胞具有較高的復(fù)蘇率及細(xì)胞活性，對(duì)于下游應(yīng)用影響較小，在保持細(xì)胞活性方面優(yōu)于流式分選。磁性分選因其高靈敏度、高純度、易操作、對(duì)目的細(xì)胞刺激較小等特性成為了細(xì)胞分選的首選方法，具有潛在的廣泛應(yīng)用前景。

根據(jù)分選方法的不同可以將免疫磁性細(xì)胞分選劃分為直接分選法和間接分選法。

●直接分選法

直接分選法是指將抗體或親和配體直接包被在磁性顆粒上，形成免疫磁性復(fù)合微粒。將其與多細(xì)胞懸液混合孵育之后，目的細(xì)胞會(huì)特異性地結(jié)合在免疫磁珠上。在外加磁場(chǎng)作用下，帶有磁珠的靶細(xì)胞會(huì)滯留在磁場(chǎng)中，而非目的細(xì)胞則會(huì)被去除。

●間接分選法

間接分選法分選細(xì)胞是引入了二抗，將目的細(xì)胞首先與對(duì)應(yīng)的一抗孵育、激活細(xì)胞，之后清洗出未結(jié)合的一抗，然后加入預(yù)先包被有二抗的磁性顆粒與活化后的細(xì)胞孵育。一抗與二抗之間的相互作用會(huì)導(dǎo)致磁粒結(jié)合在目的細(xì)胞上，同樣在磁場(chǎng)作用下滯留目的細(xì)胞，從而達(dá)到分選的目的。

目前已有分選磁珠應(yīng)用于針對(duì)細(xì)胞亞群的分選，最常見的有從人的外周血中分離細(xì)胞亞群，如B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等。

隨著腫瘤免疫理論和生物技術(shù)的發(fā)展，過繼性免疫治療在靶向性、殺傷性和持久性方面均取得了很大的進(jìn)步。以T細(xì)胞受體和嵌合抗原受體修飾了以T細(xì)胞為代表的治療新技術(shù)在體外治療和臨床試驗(yàn)中都取得了令人鼓舞的抗腫瘤效果[1]。

細(xì)胞激活

對(duì)標(biāo)近些年國內(nèi)外的研究，我們可以發(fā)現(xiàn)CD3和CD28的聯(lián)合使用具有協(xié)同免疫性。其中將CD3單抗與CD28單抗聯(lián)用不僅可以促進(jìn)一些免疫細(xì)胞的增殖，還能提高免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤的殺傷能力，兼具T淋巴細(xì)胞的抗瘤活性的同時(shí)，還保留了NK細(xì)胞的非MHC限制性的對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。免疫效應(yīng)細(xì)胞是過繼免疫治療的主體，長期以來人們不斷探討過繼轉(zhuǎn)移T細(xì)胞的采集方法、活化方式以及擴(kuò)增效率。根據(jù)T細(xì)胞活化雙信號(hào)學(xué)說，相關(guān)科研者采用CD3/CD28免疫磁珠模擬了人工抗原遞呈細(xì)胞模式。通過CD3/TCR復(fù)合體和共刺激分子雙信號(hào)通路激活T細(xì)胞[2]。CD3/CD28免疫磁珠的大小為4.5μm左右，與T細(xì)胞大小一致，可以有效地結(jié)合T細(xì)胞表面的相關(guān)受體。

抗CD3抗體免疫磁珠由高性能的特異性IgG1單克隆抗體與磁珠共價(jià)偶聯(lián)，后期經(jīng)過封閉處理，可以直接用于人CD3+細(xì)胞的捕獲，具有較高的CD3細(xì)胞結(jié)合量以及非特異結(jié)合低的特點(diǎn)。CD28抗原是I型跨膜蛋白，在大多數(shù)CD4+T細(xì)胞、許多CD8+T細(xì)胞和惡性漿細(xì)胞（骨髓瘤細(xì)胞）上高表達(dá)。而在CD28磁珠實(shí)驗(yàn)中，CD28細(xì)胞用CD28-PE和Anti-PE磁珠間接雌性標(biāo)記，通過陽選或陰選實(shí)現(xiàn)CD28陽性細(xì)胞的分離或去除。

此外，有相關(guān)研究表明，CD3/CD28免疫磁珠激活后，CD3+T細(xì)胞體外擴(kuò)增殖時(shí)長可達(dá)7-14天，如果仍需繼續(xù)激活則需要新一輪再次激活。這證實(shí)了CD3/CD28免疫磁珠可在體外實(shí)現(xiàn)CD3+T細(xì)胞的有效激活與擴(kuò)增，為腫瘤過繼免疫治療效果的發(fā)揮提供了保障！

同立海源針對(duì)T細(xì)胞分選及激活培養(yǎng)需求特征，近期新上市產(chǎn)品ActSepTM?CD3/CD28 分選激活磁珠（Cat. No. GMP-TL603）可用于分選人CD3+T細(xì)胞，不需要抗原呈遞細(xì)胞或抗原就能激活和擴(kuò)增T細(xì)胞，同時(shí)實(shí)現(xiàn)T細(xì)胞的分選、激活和擴(kuò)增。該產(chǎn)品為國內(nèi)首創(chuàng)，省時(shí)高效，應(yīng)用性能不遜色進(jìn)口主流磁珠產(chǎn)品，同時(shí)具備更明顯的價(jià)格優(yōu)勢(shì)，保證貨期，供應(yīng)穩(wěn)定可控。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

集分選激活于一體，省時(shí)高效

高穩(wěn)定性，高安全性

高分選效率，可高效激活擴(kuò)增T細(xì)胞

4.5μm超順磁珠，與細(xì)胞大小匹配

方便分離，易操作

產(chǎn)品符合ISO13485和ISO9001質(zhì)控要求

產(chǎn)品性能

??高分選效率

??有效激活T細(xì)胞

??高效擴(kuò)增T細(xì)胞

??T細(xì)胞亞群變化

可訪問同立海源網(wǎng)站或關(guān)注公眾號(hào)后進(jìn)行免費(fèi)試用申請(qǐng)

試用活動(dòng)細(xì)則：

1.活動(dòng)時(shí)間：即日起-2023年2月28日；

2.試用規(guī)格：500uL/支，濃度：2×10^ 8 beads/mL；

3.免費(fèi)試用名額有限，每個(gè)客戶限申請(qǐng)一次（注：同一導(dǎo)師或同一公司為同一客戶，不累計(jì)贈(zèng)送）；

4.申請(qǐng)要求：申請(qǐng)信息完整，能夠近期開展實(shí)驗(yàn)；

5.其他說明：試用結(jié)束后，反饋試用結(jié)果；

6.本次活動(dòng)最終解釋權(quán)歸北京同立海源生物科技有限公司所有。

參考文獻(xiàn)：

[1]?Riches JC,Gribben JC,Advances in ehimeric antigen receptor immunotherapy for ehronic lymphocytic leukemia[J].Discov Med,2013,16(90):295-302.

[2]?Fontana MF,Vance RE.Two signal models in innate inmunity[J].Immunol Rev,2011,243(1):26-39.

關(guān)于同立海源

北京同立海源生物科技有限公司，成立十余年專注細(xì)胞和基因治療（CGT）上游GMP級(jí)原料試劑研發(fā)，致力于為生命科學(xué)提供可靠的產(chǎn)品與服務(wù)。產(chǎn)品涉及真核重組蛋白、細(xì)胞分選試劑、無血清培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒、轉(zhuǎn)染試劑、工具酶。為細(xì)胞和基因治療、mRNA開發(fā)、抗體藥物開發(fā)、細(xì)胞儲(chǔ)存等生物制藥和IVD領(lǐng)域提供核心原料試劑與服務(wù)。

公司建有1300m2?B+A級(jí)潔凈車間，包括哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)蛋白質(zhì)工程平臺(tái)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)開發(fā)平臺(tái)、體外診斷試劑生產(chǎn)平臺(tái)，通過ISO13485和ISO9001雙認(rèn)證，部分產(chǎn)品已獲美國FDA DMF備案。