Jackson艾美捷Fab抗Fc片段二級抗體及使用FabuLight的技術(shù)提示
Jackson艾美捷FabuLight抗體是特異于IgG或IgM一級抗體Fc區(qū)的Fab片段二級抗體。
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它們與9種不同的熒光團和生物素結(jié)合,能夠在與細胞或組織孵育之前標記一級抗體。這為順序孵育流式細胞術(shù)和免疫組織化學(xué)程序提供了一種省時的替代方法,而不會損害一級抗體的活性部位。
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Jackson艾美捷FabuLights可用于標記融合蛋白或細胞表面免疫球蛋白的Fc結(jié)構(gòu)域,而無需交聯(lián)或激活細胞。FabuLights不會交叉吸附其他物種,因此可能需要阻斷步驟,以避免標記內(nèi)源性免疫球蛋白。
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通過減少培養(yǎng)和清洗步驟,節(jié)省時間并保存細胞
用FabuLight標記的一級抗體孵育比用一級抗體和標記的二級抗體連續(xù)孵育需要更少的洗滌,從而減少流式細胞術(shù)協(xié)議中對細胞的損傷。需要來自同一宿主動物的多個一級抗體的方案中的孵化步驟也減少了。
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對一級抗體活性部位無干擾
FabuLight與一級抗體的Fc部分(抗IgG、Fcγ特異性或抗IgM、μ鏈特異性)結(jié)合,使抗原結(jié)合區(qū)保持活性。
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無沉淀或聚集
產(chǎn)生的一級抗體與FabuLight的復(fù)合物不會沉淀或聚集,因為染料偶聯(lián)的Fab抗Fc二級抗體片段是單價的。FabuLight一級抗體復(fù)合物具有良好的組織滲透性和較低的非特異性結(jié)合。
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使用Jackson艾美捷FabuLight的技術(shù)提示?
FabuLight抗體尚未被吸附以消除對其他物種的交叉反應(yīng)性,因此在應(yīng)用FabuLiight標記的復(fù)合物之前,可能有必要在與未標記的FabuLiht孵育之前阻斷內(nèi)源性IgG。
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FabuLight標記的復(fù)合物提供的信號不如先與一級抗體進行連續(xù)孵育,然后與標記的二級抗體進行孵育。
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為了避免FabuLight一級抗體被后續(xù)標記的二級抗體取代,可能需要與戊二醛輕微交聯(lián),前提是它不會影響后續(xù)目標蛋白的抗原性。
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對于所有多重標記應(yīng)用,Jackson建議按順序培養(yǎng)FabuLights,以最小化交叉反應(yīng)性。
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首先標記含量較低的目標抗原,以獲得J佳結(jié)果。
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對于IgG類一級抗體,以3:1摩爾比的FabuLight一級抗體(等重比)絡(luò)合可提供良好的一級抗體標記,而無需過多的未結(jié)合FabuLiight。
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對于IgM一級抗體,使用15:1摩爾比的FabuLight一級抗體(等重量比)。
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對FabuLight標記的復(fù)合物與其目標抗原進行滴定,以最小化游離Fab抗Fc的量,從而最小化多重標記應(yīng)用中的潛在錯誤標記。
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Jackson ImmunoResearch專注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究,服務(wù)于大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。