植物蛋白質(zhì)組學(xué)樣品制備
樣品制備是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的關(guān)鍵步驟,因根據(jù)樣品類型、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)和使用的分析方法的不同而有所不同。百泰派克生物科技提供基于質(zhì)譜的植物蛋白質(zhì)組學(xué)分析服務(wù),包括植物蛋白質(zhì)組樣品制備服務(wù)。
植物蛋白質(zhì)組學(xué)研究特定時(shí)間或環(huán)境下植物細(xì)胞或組織的基因組表達(dá)的所有蛋白質(zhì)。與其他蛋白質(zhì)組學(xué)研究一樣,樣品制備是植物蛋白質(zhì)組學(xué)研究的第一步,也是非常重要的一步。樣品制備的主要方法為將細(xì)胞或組織等樣品進(jìn)行破碎、溶解、失活或還原,盡可能斷開蛋白質(zhì)間的連接鍵并提取全部蛋白質(zhì)。

植物細(xì)胞含有較厚的細(xì)胞壁,給樣品中蛋白質(zhì)的提取增加了一定的難度。根據(jù)植物的品種和生長(zhǎng)發(fā)育狀況不同,植物中所含生物大分子的量變化很大,另外植物中生物大分子的量還與季節(jié)關(guān)系密切。目前常用的植物蛋白的提取方法有兩種:一種是普通 Tris-HCl 提取法,該方法通過選擇適當(dāng)pH值的提取緩沖液,盡可能地溶解植物中的可溶性蛋白;另一種是三氯乙酸/丙酮沉淀法,該方法中三氯乙酸作為蛋白質(zhì)變性劑,能有效抑制絲氨酸蛋白酶和巰基蛋白酶的活性,減少蛋白損失,因此使用較為廣泛。但這兩種方法都不能有效地去除產(chǎn)物中的非蛋白物質(zhì),會(huì)對(duì)后續(xù)的研究產(chǎn)生不利的影響。酚/SDS蛋白提取法,利用酚在陰離子型表面活性劑SDS的存在條件下能充分溶解蛋白的特點(diǎn),可以在較短的時(shí)間內(nèi)充分溶解植物組織中蛋白質(zhì),得到的蛋白質(zhì)純度更高。