蛋白水解靶向嵌合體(Proteolysis Targeting Chimera,PROTAC),利用雙功能嵌合體分子同時結(jié)合靶蛋白和E3連接酶,使靶蛋白被泛素化標(biāo)記,從而進入蛋白酶體途徑被降解。PROTAC嵌合體分子由三部分組成:結(jié)合靶蛋白的配體、結(jié)合E3泛素連接酶的配體、以及兩者之間的連接鏈(linker)。

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以CDK4/6和EGFR為靶點合成了一系列化合物,從中篩選出降解靶蛋白的PROTAC嵌合體分子。方法:以CDK4/6為彈頭的PROTAC嵌合體分子ZM7、ZM8、ZM9分別以梯度稀釋濃度處理72h;以Western Blot法檢測不同給藥時間和濃度條件下ZM7、ZM8、ZM9對靶蛋白CDK4和CDK6的降解作用以及CDK4/6所在信號通路中cyclin D、Rb、phospho-Rb蛋白的表達情況。PROTAC嵌合體分子ZM3、ZM4、ZM5、ZM6分別以梯度稀釋濃度處理NSCLC72h,WST-1試劑檢測NSCLC;以Western Blot法檢測不同給藥時間和濃度條件下ZM3、ZM4、ZM5、ZM6對靶蛋白EGFR的降解作用。

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結(jié)果:ZM7、ZM8、ZM9對T-47D、MCF-7、MDA-MB-468、MDA-MB-231、ZR-75-1以及HAL-01均有增殖作用,且具有濃度依賴性,但對SK-BR-3沒有增殖作用;在給藥濃度和時間條件下,ZM7、ZM8、ZM9對CDK4和CDK6均沒有降解作用。

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(2-Pyridyldithio)-PEG4-alcohol、(2-Pyridyldithio)-PEG4-propargyl、(4-Oxo-4H-quinazolin-3-yl)-acetic acid、(4R,5S)-nutlin carboxylic acid、(5,6)TAMRA-PEG3-Azide-PEG3-Desthiobiotin、(±)15-HETE、(Ac)Phe-Lys(Alloc)-PABC-PNP

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PAC的 PROTAC-linker偶聯(lián)物

靶蛋白配體-Linker-E3 配體

烷基鏈類PROTAC 連接子

烷基/醚類連接子PROTAC分子

PEG 類PROTAC 連接子（4 個單元）合成小分子

PROTAC-抗體偶聯(lián)物 (PAC) 分子

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瑞禧WFF.2022.7