1.百螢 Cell Meter Caspase3/7/8/9活性細(xì)胞凋亡復(fù)用檢測試劑盒概述

?我們的Cell Meter 檢測試劑盒是一套用于檢測細(xì)胞生存力的工具。 有多種參數(shù)可用于檢測細(xì)胞活力。 胱天蛋白酶被廣泛認(rèn)為是細(xì)胞凋亡的可靠指標(biāo)。 該特定試劑盒設(shè)計(jì)為使用三種不同的熒光色同時(shí)監(jiān)視與細(xì)胞凋亡有關(guān)的四個(gè)關(guān)鍵半胱天冬酶（caspase-3 / 7、8和9）。 該試劑盒使用DEVD-ProRed，IETD-R110和LEHD-AMC作為分別指示caspase 3 / 7、8和9活性的熒光指示劑。 在半胱天冬酶裂解后，DEVD-ProRed ，IETD-R110和LEHD-AMC半胱天冬酶底物會(huì)產(chǎn)生三種不同的熒光團(tuán)：ProRed （紅色熒光），R110（綠色熒光）和AMC（藍(lán)色熒光）。

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2.百螢 Cell Meter Caspase3/7/8/9活性細(xì)胞凋亡復(fù)用檢測試劑盒適用儀器

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熒光酶標(biāo)儀

Ex(nm) ?????見表一

Em(nm) ?????見表一

推薦孔板 ???黑色透明底板

讀取模式 ???底部/頂部讀取

3.百螢 Cell Meter Caspase3/7/8/9活性細(xì)胞凋亡復(fù)用檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)方案

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簡要概述

1.?用測試化合物準(zhǔn)備細(xì)胞

2.?加入等量的半胱天冬酶工作溶液

3.?在室溫下孵育30分鐘至1小時(shí)

4.?檢測熒光強(qiáng)度

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溶液配制

工作溶液配制

1.單胱天蛋白酶活性工作液：將50 μL底物（組分A，B或C）加入10 mL分析緩沖液（組分D）中，制成caspase 3/7，caspase 8或caspase 9工作溶液，并充分混合。

2.雙胱天蛋白酶或三胱天蛋白酶活性工作液：將每種半胱天冬酶底物50 μL加到10 mL的測定緩沖液（組分D）中，制成工作溶液。 注意：請按比例準(zhǔn)備被測底物溶液和所需的體積。

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實(shí)驗(yàn)步驟

1.通過向PBS或所需的緩沖液中加入10 μL /孔的10X測試化合物（96孔板）或5 μL /孔的5X測試化合物（384-板）來處理細(xì)胞。對于空白孔（不含細(xì)胞的培養(yǎng)基），添加相同量的化合物緩沖液。

2.將細(xì)胞板在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育（對于用星形孢菌素處理的Jurkat細(xì)胞需要3-5小時(shí)）以誘導(dǎo)凋亡。

3.加入100 μL /孔/ 96孔或25 μL /孔/ 384孔的所需caspase分析工作溶液。

4.在避光的條件下，在室溫下孵育平板至少30至60分鐘。注意：如果需要，可在室溫下添加測定上樣溶液10分鐘之前，向選定的樣品中添加1 μL 1 mM caspase抑制劑，以確認(rèn)對caspase活性的抑制。

5.按照頂部或底部讀取模式，檢測熒光強(qiáng)度。注意：有時(shí)，底部讀數(shù)可提供更好的信噪比，如果使用底部讀數(shù)模式，則以800 rpm的速度離心細(xì)胞板（特別是非貼壁細(xì)胞）2分鐘（制動(dòng)）。