蛋白質(zhì)生物特征復(fù)雜、不同蛋白質(zhì)的數(shù)量分布跨度大、目前無直接信號(hào)放大的檢測(cè)技術(shù)，不僅給低豐度蛋白的檢測(cè)提出挑戰(zhàn)，也限制了蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)往更全面檢測(cè)方向的發(fā)展。

AOCs（Antibody?oligonucleotide conjugates）是一類抗體與寡核苷酸偶聯(lián)合成的新型嵌合生物分子，將抗體特殊的靶向識(shí)別能力與寡核苷酸在檢測(cè)、治療、成像和材料學(xué)等方向的功能相結(jié)合，目前已成為檢測(cè)、成像和治療藥物開發(fā)方向的有力工具。

抗體結(jié)合PCR實(shí)現(xiàn)對(duì)免疫信號(hào)極靈敏的放大作用，為實(shí)現(xiàn)高靈敏、多通道的蛋白質(zhì)檢測(cè)提供可能。

圖1. 抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物（AOCs）示意圖

抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物（AOCs）應(yīng)用現(xiàn)狀

免疫PCR是在ELISA的基礎(chǔ)上建立起來的，使用PCR擴(kuò)增代替ELISA的酶催化底物顯色反應(yīng)。通過DNA聚合酶將AOCs的DNA分子標(biāo)簽特異性放大，與傳統(tǒng)ELISA相比，iPCR至少可使抗體檢測(cè)的靈敏度提高1000倍。

圖2. 免疫PCR原理示意圖

PLA技術(shù)通過一對(duì)標(biāo)記有DNA寡核苷酸的單克隆或者多克隆抗體的探針（PLA探針）識(shí)別目的蛋白，當(dāng)這兩個(gè)探針識(shí)別同一個(gè)蛋白時(shí)，探針之間的距離靠近，產(chǎn)生了鄰近效應(yīng)。

接著，通過熒光PCR實(shí)現(xiàn)多種檢測(cè)寡核苷酸的雜交，可在顯微鏡下觀察、并量化。以O(shè)link公司的PEA技術(shù)通過使用DNA聚合酶規(guī)避了PLA中DNA連接酶在血漿中的使用缺陷，當(dāng)結(jié)合在同一蛋白上的抗體相互靠近時(shí)其DNA寡核苷酸互補(bǔ)配對(duì)并結(jié)合DNA聚合酶，使用qPCR或二代測(cè)序?qū)NA寡核苷酸定性定量。

圖3. PLA與PEA原理示意圖

免疫HCR規(guī)避了PLA和PEA對(duì)酶依賴性，通過使用共價(jià)連接寡核苷酸引發(fā)劑的抗體識(shí)別靶蛋白，接著用一對(duì)帶有熒光標(biāo)記的互補(bǔ)的發(fā)夾式寡聚物進(jìn)行選擇性和特異性的等溫?zé)o酶延伸，該方法能夠捕獲從單個(gè)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，并將靈敏度平均提高200倍。

圖4. 免疫HCR原理示意圖

將標(biāo)記特異性DNA寡核苷酸標(biāo)簽(Barcode）的抗體與樣本共孵育，通過二代測(cè)序識(shí)別DNA Barcode的種類或者添加熒光標(biāo)記的與Barcode互補(bǔ)的寡核苷酸探針，實(shí)現(xiàn)對(duì)組織或細(xì)胞中蛋白指標(biāo)的同時(shí)檢測(cè)及分析。

表1. 多重免疫組化與免疫熒光技術(shù)比較

近年來以10X為代表高通量單細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)，已成功將AOCs應(yīng)用于單細(xì)胞膜蛋白檢測(cè)以及多樣本標(biāo)記的混樣檢測(cè)，為單細(xì)胞蛋白組檢測(cè)提供可能。

圖5. AOCs在單細(xì)胞表面蛋白檢測(cè)中的應(yīng)用

ABclonal抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物（AOCs）技術(shù)服務(wù)介紹

ABclonal整合自身優(yōu)秀的抗體和分子酶團(tuán)隊(duì)，推出抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物（AOCs）技術(shù)服務(wù)，歡迎各位老師咨詢，期待與您的合作！

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