人白血病 T 淋巴細(xì)胞 Jurkat, Clone E6-1 由 Schneider 建立，來源于一 個 14 歲的男孩的外周血。該克隆是 Jurkat-FHCRC 細(xì)胞株的一個克?。↗urkat 的一個衍生株），經(jīng)佛波酯(phorbol esters)和外源凝集素（lectins）或抗 T3 單克 隆抗體（需要兩種物質(zhì)共同誘導(dǎo)）誘導(dǎo)后可產(chǎn)生大量 IL-2。

Jurkat細(xì)胞是一種懸浮細(xì)胞，是用于研究急性T細(xì)胞白血病，T細(xì)胞信號傳導(dǎo)以及易感病毒進(jìn)入的各種趨化因子受體，特別是HIV的表達(dá)的永生化人T淋巴細(xì)胞系。它在生物學(xué)研究上具有十分廣泛的應(yīng)用，比如應(yīng)用Jurkat細(xì)胞研究核糖核酸酶P的M1-RNA，探討抗MHCⅡ類分子轉(zhuǎn)錄激活因子(CⅡTA)的M1-RNA抑制細(xì)胞表面MHCⅡ類分子的表達(dá)。

Jurkat細(xì)胞培養(yǎng)注意要點

??Jurkat細(xì)胞為懸浮生長，理想的狀態(tài)是均勻的成團(tuán)生長；

??Jurkat細(xì)胞有密度依賴性，細(xì)胞密度低時，生長較慢，培養(yǎng)密度維持在4 ~8×10^5 /mL為宜；超過1.0 ×10^6 /mL則需要傳代。

??Jurkat細(xì)胞對機(jī)械力較敏感。正常培養(yǎng)時，應(yīng)盡量避免吹打力道過大。暴力吹打會使細(xì)胞分化和死細(xì)胞增加。

??血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。

??如生長過程中觀察到細(xì)胞團(tuán)中心發(fā)黑，代表細(xì)胞團(tuán)過大，這個時候可以輕柔的吹散較大的細(xì)胞團(tuán)，但是不用強(qiáng)行吹散成單個細(xì)胞。

Jurkat細(xì)胞換液
??補液法：培養(yǎng)基變黃時可補加適量（1~2mL）新鮮培養(yǎng)基，補加1-2次之后，用離心的方式全部換液，離心1200rpm （約250g）3分鐘。

??半換液法：以T25瓶子為例，瓶子里裝有5mL培養(yǎng)基。豎起瓶子靜置一段時間，待細(xì)胞沉底，小心吸出2.5mL的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移到離心管，離心1200rpm （約250g）3分鐘，檢查有沒有沉淀，以免損失細(xì)胞；原瓶補充2.5mL新鮮培養(yǎng)基，離心管里若有細(xì)胞，則用新鮮培養(yǎng)基重懸后放回原瓶。

??如果換液后第二天培養(yǎng)基就變得很黃，同時鏡下檢查未污染，說明細(xì)胞密度大，應(yīng)該傳代。

Jurkat細(xì)胞傳代

??搖晃培養(yǎng)瓶，把細(xì)胞搖勻，均分到兩個瓶子里，每瓶再補充等量培養(yǎng)基。

??離心法：離心后計數(shù)，按照40-50萬細(xì)胞/mL的密度接種到T25瓶里，瓶中培養(yǎng)基量以5mL為宜。不方便計數(shù)時，按1:2比例傳代。

??死細(xì)胞或細(xì)胞碎片較多的情況下，建議用離心法傳代，離心轉(zhuǎn)速可適當(dāng)降低（推薦800~1000rpm或160~200g）。

Jurkat細(xì)胞凍存
??由于Jurkat是懸浮細(xì)胞，更易受到凍存影響，建議加大凍存密度，大約200萬-300萬/mL為宜，以提高復(fù)蘇存活率。

??Jurkat細(xì)胞對凍存溫度比較敏感，建議凍存后立即轉(zhuǎn)入-80℃冰箱，長期保存應(yīng)放在液氮罐中。

??經(jīng)測試，Jurkat使用非程序降溫凍存液的復(fù)蘇存活率高于程序降溫凍存液，推薦使用HyCyte?一步凍存液（GUCP-R201）。

Jurkat細(xì)胞復(fù)蘇

??Jurkat細(xì)胞復(fù)蘇后通常需要3-5天恢復(fù)狀態(tài)，建議復(fù)蘇后48小時內(nèi)不要進(jìn)行操作。

以上內(nèi)容由海星生物提供?

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