為了保證ELISA實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃。我們提倡新鮮樣品應(yīng)盡早檢測(cè)，對(duì)收集后一周內(nèi)檢測(cè)的樣本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。如有特殊原因需要周期性收集樣本，在取材后講標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰箱與室溫有一定溫差，蛋白容易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，故應(yīng)避免反復(fù)凍融。不同的樣本請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況處理。

利用到ELISA 技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)的樣本類(lèi)型包括：血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清，皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等。

　　樣品制備方法

　　1、血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

　　2、血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3、尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4、細(xì)胞裂解液：1）貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化，離心收集細(xì)胞（懸浮細(xì)胞可直接離心收集）2）將收集到的細(xì)胞用冷 PBS 洗 3 次3）物理方法裂解細(xì)胞（可先超聲破碎細(xì)胞，再反復(fù)凍融）：①?超聲破碎：取適量 PBS 重懸細(xì)胞，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞 懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂；②?反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-20 度以下冰凍，室溫融解，反復(fù) 3 次，使細(xì)胞溶脹破碎。4）將標(biāo)本于 2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘，收集上清備用。

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5、細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成分時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成分時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

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6、腦脊液、肺泡灌洗液：樣本收集后于1000×g 離心20分鐘，離心后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20度，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。

7、皮膚組織：用勻漿機(jī)加冰的 PBS 研磨 20-50 mg 的皮膚組織使其充分溶解，離心 20 分 鐘，10000 g/分鐘，取上清檢測(cè)。

8、糞便：盡量采集干的糞便，糞便過(guò)稀會(huì)較難處理且降低檢測(cè)的準(zhǔn)確性。采集的重量應(yīng)大于50mg，將糞便用PBS洗3次（最終糞便質(zhì)量：PBS 體積=1:9），用超聲粉碎（或搗碎）后于5000×g離心10分鐘，取上清檢測(cè)。

9、唾液：將樣品收集于離心管后在-70 度冰凍 1 小時(shí)。在冰上融化樣品后，2000×g 離 心 10 分鐘，取上清檢測(cè)。

10、組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

11、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

12、不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。