我是視頻里的紅字菌，這個(gè)題確實(shí)給我留下了很深的印象，所以呢，做一個(gè)總結(jié)，希望能幫助到大家！

山東題的總結(jié)：

y基因的啟動(dòng)子+熒光蛋白

需要用到的是基因y的啟動(dòng)子，把啟動(dòng)子的那部分剪切下來(lái)，再接上熒光蛋白的基因

因?yàn)?，y基因的表達(dá)沒(méi)有明顯的特征，并不知道它是否表達(dá)了，所以，這個(gè)時(shí)候就把y基因換成熒光蛋白基因

【這與后面想知道vgt基因是否表達(dá)的操作是一樣的】

即vgt的啟動(dòng)子+ GFP綠色熒光蛋白

題目的難點(diǎn)：

①連接順序的反正

上面一段，從左往右，經(jīng)過(guò)y基因，再到終止子

下面一段，從右往左（中間空白部分必定存在著啟動(dòng)子）經(jīng)過(guò)熒光蛋白基因，再到終止子

故，連接的時(shí)候需要反過(guò)來(lái)

②用不同的酶切出相同的粘性末端，既要意識(shí)到同尾酶

限制酶的選擇：

a.排除E酶，因?yàn)闊晒獾鞍谆蛏嫌蠩酶

b.排除M酶X酶，因?yàn)槠茐牧薴1～f7的調(diào)控序列的完整性

下面一段，空白部分的三個(gè)酶切位點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的酶，都不可以用，便要尋找同尾酶?。。。?/strong>

X酶與S酶，M酶與E酶

③引入酶切位點(diǎn)，即：在擴(kuò)增目的片段的時(shí)候，在引物末端加上酶切位點(diǎn)序列（就是增加序列）

首先要注意題干?。。?/span>

“需在引物末端增加限制酶識(shí)別序列”?。?！

由此可知，需要增加序列

題目所問(wèn)的是， F1～f7與R末端增加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶，重點(diǎn)還是限制酶的選擇

不過(guò)，需要提一嘴

添加序列，是為了調(diào)控序列及啟動(dòng)子的那片段切割和轉(zhuǎn)移到載體上，與熒光蛋白基因結(jié)合

a.因?yàn)椋{(diào)控序列及啟動(dòng)子上，只有兩個(gè)酶切位點(diǎn)，而他們所對(duì)應(yīng)的酶是不能用的，故只能增加序列

b.上面一段，增加序列后，在用同尾酶 M酶和E酶切下來(lái)

下面一段，則需要用M酶和X酶

雖然，上下兩段的末端用了兩種不同的酶，但是他們切割出了相同的黏性末端！！所以，可以用連接酶連接起來(lái)?。?/strong>

這就是同尾酶的作用

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