對于養(yǎng)細(xì)胞的科研工作者，可謂是談“污”色變，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，不論是成手還是新手，都無法避免的遭受過細(xì)胞污染的“禍害”，不管是細(xì)菌、真菌、黑膠蟲還是支原體，一旦招惹上這幾個家伙，各個都是來者不善，甚至讓您的細(xì)胞面臨“絕種”的風(fēng)險。針對細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)中面臨的最普遍的問題，作為科研工作者的我們必須清楚認(rèn)識這些微生物，并通過技術(shù)手段判斷細(xì)胞遭受了哪種污染，準(zhǔn)確的對癥下藥，才能為我們的細(xì)胞保駕護航。

1 細(xì)菌污染

1.1 細(xì)菌污染的鑒別

細(xì)菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)中最常出現(xiàn)的污染類型，槍頭不小心碰到瓶壁、手不小心從培養(yǎng)瓶口處穿過、培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)瓶，不經(jīng)意的一個小動作，都可能會造成細(xì)菌污染，以致于實驗前功盡棄。

細(xì)菌污染在沒有爆發(fā)或培養(yǎng)體系中含有雙抗時，細(xì)菌污染較容易被科研工作者忽視，黑點在顯微鏡下一穿而過，小黑點因為數(shù)量少且移動迅速而不易發(fā)現(xiàn)。隨著細(xì)菌在培養(yǎng)體系中的增多或者體系中撤掉雙抗以后，細(xì)菌可以從鏡下明顯識別，會呈現(xiàn)黑色條狀、棒狀、球狀，培養(yǎng)基的外觀也會發(fā)生明顯的變化，培養(yǎng)變渾濁，有細(xì)沙狀沉淀，有時會伴有臭味。

1.2 細(xì)菌污染的解決方式

一般的細(xì)胞培養(yǎng)體系中，普遍采用雙抗或者三抗進行細(xì)菌的預(yù)防，但這兩者存在一定的局限性，比如只能預(yù)防，而不能拯救已經(jīng)細(xì)菌污染的細(xì)胞。另外，很多科研工作者從事原代的細(xì)胞分離和培養(yǎng)工作，在從動物身上取材并分離培養(yǎng)的過程中，極易造成細(xì)菌污染，如果只是加入雙抗或三抗進行沖洗組織，細(xì)菌污染無法避免，造成了珍貴動物組織的浪費。

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Deeming細(xì)胞污染高效清除劑，不僅兼具雙抗或三抗預(yù)防細(xì)菌的功效，還可以清除支原體污染，有效消除真菌和細(xì)菌的污染，只需1-3天就可顯著抑制支原體、真菌、細(xì)菌的增殖，本產(chǎn)品經(jīng)過了上百種細(xì)胞的測試和長期的實驗驗證，完美兼具高效和廣譜清除細(xì)胞污染物的能力，對細(xì)胞生長幾乎無影響，最大程度上挽救您的細(xì)胞。

2 真菌污染

2.1 真菌污染的鑒別

實驗室污染的真菌一般為三類：念珠菌、酵母菌、霉菌，細(xì)胞污染真菌通常不易察覺，只有霉菌會逐漸出現(xiàn)細(xì)絲團狀漂浮物，較容易從外觀發(fā)覺污染，其他真菌污染不像細(xì)菌污染培養(yǎng)基會渾濁，污染后培養(yǎng)液清澈透亮，與未污染的細(xì)胞從外觀上看無明顯變化。在顯微鏡下比較容易判斷污染類型，念珠菌呈卵圓狀，在細(xì)胞周邊生長，酵母菌出芽生殖時有明顯的一大一小連體結(jié)構(gòu)，霉菌可觀察到菌絲體，菌絲呈絲狀、管狀、樹枝狀。

2.2 真菌污染的解決方式

真菌污染由于不容易通過培養(yǎng)基的變化來判斷，一般發(fā)現(xiàn)時就是已經(jīng)爆發(fā)了，鏡下會出現(xiàn)明顯團狀或黑色絲狀污染物，細(xì)胞狀態(tài)明顯變差，很難救活。傳統(tǒng)的預(yù)防真菌污染的方式為培養(yǎng)體系中加入三抗，但是一旦發(fā)生真菌污染，三抗對于明顯的真菌污染就顯得心有余而力不足，此時建議如果是還留存種子的細(xì)胞就立刻扔掉，徹底消毒滅菌細(xì)胞房和CO2培養(yǎng)箱，扔掉可能被污染的培養(yǎng)基，對用過的實驗器材進行滅菌。

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真菌清除劑用于防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中的真菌（包括酵母）污染，還可用于消除細(xì)胞培養(yǎng)物中的真菌（含酵母）污染。療效遠(yuǎn)超真菌抗生素兩性霉素B，對細(xì)胞培養(yǎng)過程中的真菌污染，如白色念珠菌、曲霉、酵母有很好的療效。

真菌清除試劑經(jīng)過了上百種細(xì)胞的測試和長期的實驗驗證，只需1-3天就可以抑制真菌增長。對細(xì)胞基本無害，具有高效、特異性殺滅的特點，最大程度上挽救珍貴的細(xì)胞，減少真菌污染帶來的損失。

3 黑膠蟲污染

3.1 黑膠蟲污染的鑒別

“黑膠蟲”是一種常見的細(xì)胞污染物，與細(xì)胞共生，隨細(xì)胞傳代而傳代?！昂谀z蟲”與細(xì)胞競爭性生長，對細(xì)胞生長不利，嚴(yán)重時導(dǎo)致細(xì)胞死亡。目前很多細(xì)胞存在被“黑膠蟲”污染的現(xiàn)象，對細(xì)胞培養(yǎng)及其后續(xù)實驗造成了極大地影響?！昂谀z蟲”污染的細(xì)胞常見的特性有以下幾點：（1）培養(yǎng)基不渾濁，但在顯微鏡下觀察細(xì)胞時，細(xì)胞周圍和培養(yǎng)液中有很多“小黑點”，且隨著培養(yǎng)時間的延長“小黑點”逐漸增多，更換培養(yǎng)液或洗滌細(xì)胞不能將其去除；（2）“黑膠蟲”污染的細(xì)胞，營養(yǎng)消耗快，需要頻繁更換培養(yǎng)液；（3）“黑膠蟲”污染的細(xì)胞生長緩慢，細(xì)胞狀態(tài)差，空泡化嚴(yán)重，甚至還可能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)的改變。

3.2 黑膠蟲污染的解決方式

對于黑膠蟲污染的細(xì)胞，最為快速有效的處理方式就是采用黑膠蟲清除劑對黑膠蟲進行清除，同時確保培養(yǎng)體系中的血清必須為無黑膠蟲和原蟲污染的優(yōu)質(zhì)血清。

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黑膠蟲清除試劑用于清除細(xì)胞培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的“黑點”，只需1-3天就可以顯著抑制“黑點”生長，一周左右即可清除“黑點”。

本產(chǎn)品經(jīng)過了上百種細(xì)胞的測試和長期的實驗驗證，對細(xì)胞生長無明顯影響，具有高效、特異性殺滅的特點，可顯著清除黑膠蟲污染，最大程度上挽救珍貴的細(xì)胞。

黑膠蟲清除案例

4 支原體污染

4.1 支原體污染的鑒別

支原體直徑約為0.1-0.3 μm，具有變形能力，可透過常見過濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規(guī)的無菌過濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對支原體無效。支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一個世界性問題，世界各國細(xì)胞系支原體污染的平均比例為30-60%。支原體可通過細(xì)胞之間交叉污染，操作人員的口腔、皮膚造成污染，或者血清等添加物而帶入污染。

支原體在光學(xué)顯微鏡下不可見，一般不會引起培養(yǎng)物混濁，因此細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺。支原體會消耗必須氨基酸，影響細(xì)胞生長速率，促進代謝物積累，改變細(xì)胞形態(tài)，影響 DNA、RNA 以及蛋白質(zhì)的合成，抑制細(xì)胞因子表達(dá)，改變被污染細(xì)胞的基因表達(dá)譜，誘導(dǎo)染色體畸變。

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支原體PCR檢測試劑盒是優(yōu)選直擴式PCR酶擴增支原體基因組中保守16SrDNA而設(shè)計的，不會擴增細(xì)菌等其他基因組，兼具特異性和高靈敏性的特點，且本試劑盒檢測范圍廣，可檢測：(1)M.Hyorhinis，(2)M.Fermentans，(3)M.Arginini，(4)M. hominis，(5)M. orale，(6)M. salivarium，(7)M.pirum，(8)Acholeplasma Laidlawii，(9)M. agalactiae，(10)M.bovis，(11)M. buccale，(12)M. arthritidis，(13)M. pulmonis等幾乎所有常見的污染細(xì)胞的支原體(注：M.為Mycoplasma的縮寫)。以上13種支原體約占細(xì)胞支原體污染的99%以上。絕大多數(shù)支原體污染集中于前8種。因此非常適合于與細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)的科研實驗室及企業(yè)的日常支原體檢測。

●高廣譜性，可檢測所有可能含有支原體的樣品

●高靈敏度，可檢測低至10 copies的支原體

●高特異性，真核生物、細(xì)菌的基因組不會被檢測

●高保真性，本試劑盒含有陽標(biāo)和陰標(biāo)，可有效避免PCR反應(yīng)假陰性和假陽性

●操作簡易，本試劑盒的預(yù)混體系包含PCR反應(yīng)所需試劑

●耗時短，本試劑盒能夠在2小時內(nèi)完成支原體檢測

4.2支原體污染的解決方式

好物推薦-迪醫(yī)明（Deeming）支原體預(yù)防劑

支原體預(yù)防試劑適合細(xì)胞支原體感染的預(yù)防，不僅可用于預(yù)防環(huán)境和體系可能造成的支原體交叉污染，還可應(yīng)用于防止支原體污染的復(fù)發(fā)。

本產(chǎn)品經(jīng)過了上百種細(xì)胞的測試和長期的實驗驗證，只需1-3天就可以顯著抑制支原體生長，對細(xì)胞生長幾乎無影響，完美兼具高效與溫和清除細(xì)胞污染物的特點，最大程度上挽救您的細(xì)胞。

好物推薦-迪醫(yī)明（Deeming）支原體清除劑（三款）：支原體高效清除劑、支原體清除劑、支原體清除劑plus

支原體清除劑適合支原體污染嚴(yán)重的細(xì)胞，不僅可用于細(xì)胞株，還可應(yīng)用于“脆弱”和易變形的細(xì)胞，如各類原代細(xì)胞、干細(xì)胞、上皮樣細(xì)胞系，不僅可以顯著清除支原體污染，還具有消除細(xì)菌污染的能力。

支原體清除劑有三種，分別是支原體清除劑、支原體高效清除劑、支原體清除劑plus。

支原體溫和清除劑：溫和、高效清除支原體，對細(xì)胞生長幾乎無影響，完美覆蓋所有細(xì)胞類型。

支原體清除劑：適合支原體污染非常嚴(yán)重，產(chǎn)生較強耐藥性的細(xì)胞支原體清除。

支原體清除劑plus：適用于支原體污染非常嚴(yán)重、有極強耐藥性且污染多種支原體的情況，此情況較為少見。

本產(chǎn)品經(jīng)過了上百種細(xì)胞的測試和長期的實驗驗證，只需1-3天就可以顯著抑制支原體生長， 2周左右即可清除支原體污染，完美兼具快速和高效清除細(xì)胞污染物的特點，最大程度上挽救您的細(xì)胞。

支原體清除案例

如上圖1所示，左側(cè)為支原體污染的MCF-7細(xì)胞，右側(cè)為支原體清除后的MCF-7細(xì)胞，倒置顯微鏡下可明顯看出細(xì)胞間隙間黑點明顯減少，細(xì)胞邊緣清晰，狀態(tài)良好。

如上圖2所示，左側(cè)為支原體污染的Hep G2細(xì)胞，右側(cè)為支原體清除試劑處理的Hep G2細(xì)胞。左側(cè)有支原體污染的細(xì)胞樣品可以觀察到細(xì)胞核周圍微粒狀或絲狀藍(lán)色熒光。支原體污染嚴(yán)重的細(xì)胞可以觀察到大量微粒狀或絲狀藍(lán)色熒光。右側(cè)細(xì)胞支原體污染被清除干凈，僅觀察到細(xì)胞核的藍(lán)色熒光，證明支原體已被清除干凈。

細(xì)胞污染不易察覺，卻是關(guān)乎我們實驗成敗的大事，越是需要我們?nèi)粘５恼J(rèn)真對待，相信以上對于細(xì)胞房常見污染物的鑒別和解決方案的制定，能幫助我們科研工作者解決細(xì)胞最重要的問題，如果您還是未找到問題所在，歡迎您登錄迪醫(yī)明官網(wǎng)，我們期待著為您解答。