生物素標(biāo)記主要包括哪些反應(yīng)類型了?從6個(gè)方面進(jìn)行說明

生物素(biotin)是一種天然易得的維生素類小分子化合物。親和素(avidin),包括同族蛋白鏈霉親和素(streptavidin),是可和生物素結(jié)合的四聚體蛋白。生物素與親和素的結(jié)合是已知自然界中的非共價(jià)相互作用之一,有良好耐受力,因此它們常常組合成生物素-親和素系統(tǒng)(Biotin-Avidin System,BAS)被廣泛用于分子生物學(xué)與生物納米技術(shù)中 。
同時(shí)生物素本身是個(gè)游離的小分子,在生物實(shí)驗(yàn)中常常需要把它以共價(jià)鍵的方式標(biāo)記到蛋白或生物材料上,從而來利用BAS系統(tǒng)強(qiáng)大的特異性和親和力來信號放大,定量檢測和樣品純化。這個(gè)標(biāo)記生物素的過程就叫生物素化。西安凱新生物公司提供各種生物素化試劑,可選擇性的標(biāo)記目標(biāo)大分子上的胺基,巰基,羧酸等基團(tuán)上。
一般來說生物素標(biāo)記試劑選擇主要有以下幾種:
1.胺基生物素化 (Amine Biotinylation)
這類標(biāo)記試劑可選擇性的,高效的標(biāo)記生物素到目標(biāo)大分子表面的伯氨基團(tuán)上。這類活性氨基廣泛存在于蛋白(如ε-lysine and N-terminus)表面,高分子材料(如PEI)和納米粒等材料上。氨基標(biāo)記是常用的生物素化方式和試劑。
主要試劑類型有:
Biotin-PEG6-amine
Amino-PEG23-amine
Biotin-SS-Amine HCl Salt
Biotin-SS-Amine HCl Salt
Fluorescein-PEG6-Amine
2.巰基生物素化 (Thiol Biotinylation)
這類試劑一般含有馬來酰胺(maleimide), 鹵乙酰(如iodoacetyl)或者活化巰基(如pyridyldithiol)等可和游離態(tài)巰基反應(yīng)的官能團(tuán)。巰基存在于蛋白和抗體的雙硫鍵及胱氨酸上,經(jīng)活化后可和這類生物素化試劑反應(yīng)生成穩(wěn)定的硫酯鍵或雙硫鍵,從而在蛋白上標(biāo)記生物素。
主要試劑類型有:
Biotin-PEG6-Mal
3.羰基生物素化 (Carbonyl Biotinylation)
在中性水溶液中,羰基類化合物,包括醛和酮,可以和酰肼或者羥胺反應(yīng)形成穩(wěn)定的偶聯(lián)(腙)。利用這一反應(yīng)原理,可將帶羰基的目標(biāo)分子生物素化。對于糖基化的蛋白,可以通過氧化反應(yīng)將糖環(huán)氧化為醛基,從而實(shí)現(xiàn)蛋白的生物素化標(biāo)記。
4.羧酸生物素化 (Carboxyl Biotinylation)
這是一類氨基化修飾過的生物素。多肽的羧基(比如C端),帶游離羧酸基的高分子材料,表面含羧酸基團(tuán)的微粒等,通過EDC等活化劑活化,和這類生物素試劑反應(yīng),實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的生物素化標(biāo)記。
5.點(diǎn)擊化學(xué)標(biāo)記生物素 (Click Biotinylation)
點(diǎn)擊化學(xué)是綠色,高效,靈敏,穩(wěn)定的標(biāo)記反應(yīng)??稍谒?,有機(jī)相或者混合相中,也可在細(xì)胞培養(yǎng)基中或者動(dòng)物體內(nèi),完成各種復(fù)雜的標(biāo)記任務(wù)。點(diǎn)擊化學(xué)生物素標(biāo)記試劑包含各種點(diǎn)擊化學(xué)官能團(tuán)修飾的生物素,適用于各種生物素標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。
主要試劑類型有:
N-(DBCO-PEG4)-N-Biotin-PEG4-acid
PC DBCO-PEG3-biotin
DBCO-Biotin
Dde Biotin-PEG4-DBCO
6.標(biāo)記脫硫生物素 (Desthiobiotinylation)
脫硫生物素是生物素的變種。由于與親和素(Avidin和Streptavidin)的結(jié)合力較低,脫硫生物素標(biāo)記的蛋白能被洗脫下來,因此,常常用于蛋白純化實(shí)驗(yàn)等。
主要試劑類型有:
Desthiobiotin NHS Ester
D-Desthiobiotin Amine
Desthiobiotin-PEG4-Amine
Desthiobiotin-PEG4-Alkyne
Desthiobiotin-PEG4-Azide
Desthiobiotin-PEG4-DBCO
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