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PEPC丨磷酸烯醇丙酮酸羧化酶生物學(xué)研究

2021-08-31 16:12 作者:艾美捷  | 我要投稿

PEPC(磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶),EC=4.1.1.31,屬于羧基裂解酶家族,催化向磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)中添加二氧化碳以形成草酰乙酸。備選名稱:PEPCase 1、PEPCase 3、PEPC 1、PEPC 3

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PEPC丨磷酸烯醇丙酮酸羧化酶免疫原

KLH結(jié)合合成肽高度保守PEPC1和來自不同植物物種的序列,包括擬南芥Q9MAH0、At1g53310(PEPC 1)、Q84VW9、At3g14940(PEPC 3)。選擇用于誘導(dǎo)該抗體的肽在該酶NP_177043.2(PEPC 4)的細(xì)菌類型中也完全保守。

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艾美捷PEPC丨磷酸烯醇丙酮酸羧化酶?應(yīng)用實(shí)例:


在4-12%NuPage(Invitrogen)LDS-PAGE上分離(1)用蛋白質(zhì)提取緩沖液提取的擬南芥葉、用PEB提取的菠菜總細(xì)胞、用PEB提取的大麥總細(xì)胞、用PEB提取的玉米總細(xì)胞中的5μg總蛋白,并在PVDF上雜交1h。在室溫下攪拌,在20 mM Tris、137 mM氯化鈉pH 7.6和0.1%(v/v)吐溫-20(TBS-T)中加入2%封閉試劑(GE Healthcare)1小時(shí)后,立即封閉印跡。在室溫下攪拌,以1:10000的稀釋度在一級(jí)抗體中培養(yǎng)印跡1h。傾析抗體溶液,將印跡短暫沖洗兩次,然后在室溫下攪拌,在TBS-T中洗滌一次15分鐘,洗滌3次5分鐘。在室溫下,在2%封閉溶液中稀釋至1:50 000的二級(jí)抗體(抗兔IgG-辣根過氧化物酶結(jié)合物)中攪拌1小時(shí),培育印跡。按照上述方法清洗印跡,并根據(jù)制造商說明使用化學(xué)發(fā)光檢測試劑顯影5分鐘。使用CCD成像儀(FluorSMax,Bio-Rad)和Quantity One軟件(Bio-Rad)獲得斑點(diǎn)圖像。

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Agrisera公司提供的植物領(lǐng)域的抗體涵蓋擬南芥、萊茵衣藻、藍(lán)藻、松柏類、硅藻、大豆、大麥、蒺藜苜蓿等等。艾美捷科技是Agrisera的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的PEPC丨磷酸烯醇丙酮酸羧化酶。


PEPC丨磷酸烯醇丙酮酸羧化酶生物學(xué)研究的評(píng)論 (共 條)

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