S系列 在蛋白孵育之后，芯片可以被放進(jìn)50ml管里buffer保存 方芯片，手動(dòng)關(guān)門 douk chip 1換芯片 儀器右側(cè): 2換緩沖液 water 去離子水洗進(jìn)樣針 waste 3 change solution 使管路都置于緩沖液中約6分 鐘 4 開(kāi)樣品倉(cāng) (程序or儀器下方按鈕) 左側(cè)放96孔板，右側(cè)放reagent(放回時(shí)字朝自己)

今日例子蛋白和蛋白互作(抗原抗體) 1固定配體 首先是用公式計(jì)算配體偶聯(lián)量，配體150kd 11.8kd Rl 為1271 計(jì)算兩倍的2500RU 其次是預(yù)富集，用醋酸鈉稀釋配體到20ug/ml, 按電腦最上方順序設(shè)置條件: 選2號(hào)通道，數(shù)據(jù)采集頻率 1 ，單位可設(shè)置為uM ，溫度25 進(jìn)樣時(shí)間設(shè)置60 其他默認(rèn)，reaction 50mM NaOH. 設(shè)置5.5 5.0....等條件 running 第一個(gè)5.5

第二個(gè)5.0

夠用溫和的原則，確定用5.5的pH 2偶聯(lián) CM5芯片 第一個(gè)高偶聯(lián)適合小分子，第二個(gè)適合蛋白質(zhì) 選通道時(shí)選1和2通道都活化(EDC, NHS 分裝，置于-20℃保存)(芯片活化前后信號(hào)值會(huì)改變，前后差值在一般＞100)

封閉(乙醇胺4℃保存)， 今日舉例：只連2通道，后續(xù)有6步 儀器會(huì)自動(dòng)做個(gè)預(yù)富集 后續(xù)會(huì)活化，偶聯(lián)，封閉

target 模式， 脈沖試進(jìn)樣，查看進(jìn)樣蛋白量是否達(dá)到設(shè)定值。 target 模式(蛋白和蛋白互作) 4 做再生條件篩選 二點(diǎn)5.0。一點(diǎn)我這里面只有一個(gè)2.5就是這個(gè)2.5,然后的話我們現(xiàn)在要去進(jìn)這個(gè)分析勿了其實(shí)現(xiàn)在,分析把它稀釋成抑郁的濃度然后連續(xù)近幾次樣子就進(jìn)一下這個(gè)分析,用這個(gè)咱們?nèi)ハ慈缓笤龠M(jìn)這個(gè)再再進(jìn)這個(gè)比如說(shuō)我做過(guò)三次然后看一下,機(jī)械然后洗完之后第二次再進(jìn)同樣的這個(gè)樣品的時(shí)候是不是達(dá)到差不多的,不過(guò)這兩條都滿足的話就說(shuō)明我這個(gè)暫時(shí)也是ok的對(duì)吧就可以,我們現(xiàn)在就去做。 第一次進(jìn)樣，再生后沒(méi)有回到基線，是因?yàn)樾酒瑒偸褂貌惶€(wěn)定，重點(diǎn)看后面幾次的再生情況

第二次進(jìn)樣

第三次進(jìn)樣 圖上看出再生條件沒(méi)有破壞蛋白活性

5摸索完再生條件后，正式實(shí)驗(yàn)用預(yù)設(shè)好的方法來(lái)做 篩選實(shí)驗(yàn)，親和力實(shí)驗(yàn)，動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)

先跑3-5個(gè)循環(huán)的startup(用running buffer) 讓儀器熟悉 進(jìn)樣 解離 再生 變量設(shè)置 設(shè)置：前后各做一個(gè)零濃度，中間設(shè)置濃度梯度