磷酸化蛋白實驗丨Cell Biolabs丨PhosphoBlocker 封閉液方案
WB是條不歸路，WB難，磷酸化蛋白的WB就更難了。。。
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有的人，做了200多次磷酸化蛋白，出結(jié)果的只有60幾次，與理論一致的只有40次不到。令人崩潰。。。
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現(xiàn)實情況確實如此，內(nèi)源性目的蛋白本身在細(xì)胞裂解物中表達(dá)豐度不高，而其磷酸化修飾的蛋白含量就更低了！即使用高濃度抗體，延長曝光時間，依舊很難獲得理想的效果。大多數(shù)市售的WB封閉劑（如牛奶，血清，BSA）雖然可以滿足阻斷膜上的未反應(yīng)位點，減少檢測過程中非特異性抗體的數(shù)量，但它們并不是為了在印跡過程中保護(hù)磷蛋白抗原而設(shè)計的，本身含有磷酸化蛋白成分，因而并不能為磷酸化WB雪中送炭！
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接下來就說一下解決方案吧~
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艾美捷?Cell Biolabs丨磷酸化抗體專用：PhosphoBlocker封閉液。
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艾美捷?Cell Biolabs丨PhosphoBlocker封閉液特點：
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1.與奶粉，血清，BSA相比，更卓越的封閉效果
2.同時，可作為抗體稀釋液使用，無需單獨購買
3.增強低水平的磷蛋白信號而不增加背景
4.在Western Blot期間保留磷蛋白抗原
5.易于使用的預(yù)混合干混合物
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艾美捷?Cell Biolabs丨PhosphoBlocker?效果對比：
Fig. A549細(xì)胞裂解液，檢測磷酸化-p38蛋白.
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Cell也在用的磷酸化抗體專用封閉液：
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Orthofer, Michael, et al. "Identification of ALK in Thinness." Cell181.6 (2020): 1246-1262.
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