??一般來說分子量越小的蛋白條帶越易呈現(xiàn)出向四周彌散的趨勢，甚至最終看不到條帶，其原因是分子量越小的蛋白所能結(jié)合到的SDS也就越少，在電場作用下，蛋白向前遷移過程中會向四周彌散，最終呈現(xiàn)不出相應(yīng)的蛋白條帶?？梢詤⒖家韵路椒ń鉀Q：

? （1）?一般20kd以下的蛋白，電泳選擇15%以上的膠。

? （2）增加濃縮膠比例，濃縮膠和分離膠為1:1，或者根據(jù)自身具體情況來調(diào)整，使蛋白樣品在分離前充分聚集、壓平，一定程度上有助于蛋白分離。

? （3）?縮短電泳的距離，可以減少蛋白遷移過程的彌散程度，但需要確保目的蛋白和內(nèi)參區(qū)分開。

? （4）電泳過程中注意降溫，溫度升高會加快小蛋白分子的運動，增加彌散速度。

? （5）轉(zhuǎn)膜液不要加SDS，要加10-20%的甲醇；甲醇的作用有兩方面：一是將小分子蛋白上的SDS洗脫，帶的負電荷減少，減慢移動速度，能有效防止其穿透PVDF膜；二是可以幫助轉(zhuǎn)到膜上的蛋白固定在膜上，使其不易脫落。

? （6）轉(zhuǎn)膜一定要選擇0.22μm的PVDF膜，17kd以下的蛋白基本會穿透0.45μm的膜；當穿透嚴重時，可以用兩張0.22μm膜疊加使用。

? （7）還可以減少轉(zhuǎn)膜時間，降低轉(zhuǎn)膜的電壓電流，200mA-250mA轉(zhuǎn)15-30min差不多就可以了。

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