Thermo Scientific Q Exactive組合型四極桿Orbitrap 質(zhì)譜儀引入了Quanfirmation 的概念，即使用單個質(zhì)譜儀在一次分析中常規(guī)而自信地鑒定、定量和確認。Q Exactive Plus 組合型四極桿 Orbitrap 質(zhì)譜儀以更出色的性能和全新的選項使 Quanfirmation 邁進一步。

Q Exactive Plus質(zhì)譜儀的結(jié)構(gòu)

與Q Exactive質(zhì)譜儀一樣，Q Exactive Plus由六個主要組件組成，包括離子源、具有質(zhì)量分辨能力的flatapole技術(shù)、用于選擇前體離子的四極桿質(zhì)量過濾器，用于短選擇的彎曲線性阱（C-trap）、碰撞室和用于傅立葉變換質(zhì)量分析的Orbitrap分析儀。

flatapole既作為離子聚焦裝置，又作為離子預(yù)過濾裝置。為了使離子沿著透鏡的軸聚焦，電極上加了一個RF電壓。另外，一個DC電壓被施加到flatapole上。在正離子模式下，此電壓相對于S-lens出射透鏡產(chǎn)生一個負電位差。在負離子模式下，此電壓差會反轉(zhuǎn)。在離子預(yù)過濾模式下，附加的DC電壓（符號相反但大小相等）被施加到相對的電極組上，以粗略過濾掉從四極桿通過的離子的窄窗口周圍的寬窗口之外的離子。對于四極桿質(zhì)量過濾器，Q Exactive Plus MS采用先進的四極桿技術(shù)（AQT），其中包括一個雙曲線分段四極桿，以實現(xiàn)更高的傳輸效率和優(yōu)化傳輸窗口形狀。

在Q Exactive Plus質(zhì)譜儀中，在樣品被引入API離子源后，flatapole將離子傳輸?shù)剿臉O桿。此外，根據(jù)離子的質(zhì)荷比（m/z），flatapole還可以用作離子的粗略預(yù)過濾。四極桿可以根據(jù)m/z比傳輸和過濾離子。然后離子被轉(zhuǎn)移到C-trap中，在那里離子被積累并且它們的能量被浴氣衰減。然后離子被注入Orbitrap分析儀以獲得質(zhì)譜圖。此外，為了進行MS/MS實驗或全離子裂解（AIF），離子會通過C-Trap進入HCD室進行裂解。破碎后，離子被轉(zhuǎn)移回C-Trap并被注入Orbitrap分析儀進行檢測。

Q Exactive Plus質(zhì)譜儀的特點

幾種方法用于定量，包括選擇離子監(jiān)測（SIM）、平行反應(yīng)監(jiān)測（PRM）和數(shù)據(jù)非依賴采集（DIA）。在SIM中，可以檢測有一個或多個特定m/z值的離子，這提供了高特異性和靈敏度。在PRM中，四極桿中選擇了預(yù)先定義好的前體離子，并通過C-trap轉(zhuǎn)移到HCD室中進行裂解。碎片化后，碎片離子被轉(zhuǎn)移回C-trap，最終注入Orbitrap質(zhì)量分析儀中進行分析。在DIA中，選定m/z范圍內(nèi)的所有離子都被碎片化，并在MS/MS的第二階段進行分析，之后可以使用改進的庫對數(shù)據(jù)進行研究以生成更好的數(shù)據(jù)。

先進的軸向光束導(dǎo)向（AABG）具有更高的靈敏度和最大的穩(wěn)健性。帶有預(yù)過濾第二代軸向場彎曲flatapole離子導(dǎo)向器的AABG通過防止中性粒子和高速團簇進入四極桿來降低噪聲。

先進的四極桿技術(shù)（AQT）可實現(xiàn)出色的前體分離。帶有分段四極桿質(zhì)量過濾器的AQT可以提供更高的離子傳輸率和出色的分離窗口形狀。可變的前體分離寬度選擇范圍為0.4D到整個質(zhì)量范圍。AQT優(yōu)化了前體離子的選擇和傳輸，改善了最復(fù)雜基質(zhì)中低豐度離子的定量。

可選的完整的蛋白質(zhì)模式。它提供了對大分子的出色捕獲能力，以改善完整蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)復(fù)合物的分析。

Q Exactive Plus質(zhì)譜儀的應(yīng)用

1. 蛋白質(zhì)鑒定。Q Exactive Plus MS可以提高蛋白質(zhì)鑒定的靈敏度和精確度。AABG和AQT改善了復(fù)雜基質(zhì)中低豐度蛋白質(zhì)的鑒定，同時提供了最大的可靠性和可信度。

2. 完整的蛋白質(zhì)表征。借助新的完整蛋白質(zhì)和增強的分辨率模式，Q Exactive Plus系統(tǒng)可以可信地分析完整蛋白質(zhì)并以出色的靈敏度通過同位素解析大至50 kDa的亞基。對于治療性蛋白質(zhì)和單克隆抗體（mAb）分析，這可能是一個不錯的選擇。

3. 高可信度的定量。帶有AQT的Q Exactive Plus質(zhì)譜儀可優(yōu)化離子選擇和傳輸，改善狹窄分離窗口內(nèi)低豐度離子的定量，可被用于等壓質(zhì)量標記（如串聯(lián)質(zhì)量標記，TMT）。帶有PRM和高分辨率精確質(zhì)量選擇離子監(jiān)測（HRAM-SIM）的Q Exactive Plus系統(tǒng)可對肽和小分子進行定量，具有出色的靈敏度和無與倫比的選擇性。此外，DIA可以提供高通量的蛋白質(zhì)定量和定性確認。

Q Exactive Plus質(zhì)譜儀將四極桿前體離子選擇與HRAM Orbitrap結(jié)合，可以更可靠地鑒定和定量更多的化合物。