大量證據(jù)表明，巨噬細胞，包括滯留的肺泡巨噬細胞和從血液中招募的巨噬細胞，在急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）的發(fā)病機制中起著重要作用。然而，巨噬細胞通過促進氧化應激和炎癥反應誘導急性肺損傷（ALI）的分子機制尚不清楚。

AbMole（https://www.abmole.cn/）精研抑制劑十年，最新的科研動態(tài)不斷與您分享。本期與您分享的是：在脂多糖誘導的急性肺損傷中，核SPHK2/S1P通過促進p53乙?；T導氧化應激和NLRP3炎癥小體激活。

研究發(fā)現(xiàn)，ARDS患者外周血單個核細胞（PBMCs）中線粒體活性氧（mtROS）、SPHK2和激活的NLRP3炎性小體水平高于健康志愿者。在LPS處理的RAW264.7和THP-1細胞中也得到了類似的觀察結(jié)果。LPS暴露后，巨噬細胞SPHK2酶活性、NLRP3炎性小體激活和mtROS顯著上調(diào)。

此外，通過shRNA敲除或抑制SPHK2可顯著降低LPS誘導的M1巨噬細胞極化、氧化應激和NLRP3炎性小體激活。進一步研究表明，上調(diào)SPHK2可提高核1-磷酸鞘氨醇（S1P）水平，進而抑制HDACs酶活性，促進p53乙?；?。p53的乙?；鰪娏似渑cNLRP3啟動子特定區(qū)域的結(jié)合，并驅(qū)動NLRP3的表達。

在體內(nèi)實驗中，觀察到SPHK2特異性抑制劑Opaganib（ABC294640）治療可以明顯緩解LPS誘導的ALI，其表現(xiàn)為降低炎癥細胞浸潤，增加M2巨噬細胞極化，減輕肺組織氧化損傷。此外，抑制SPHK2還可以減少乙?；痯53蛋白的積累和NLRP3炎癥小體的激活。

綜上所述，研究結(jié)果首次證明，核S1P可以通過影響HDACs酶活性來調(diào)節(jié)非組蛋白的乙酰化水平，并將其與氧化應激和炎癥反應的環(huán)境信號聯(lián)系起來。這些數(shù)據(jù)為SPHK2可能是ARDS的有效治療靶點提供了理論依據(jù)。

?

Opaganib（ABC294640）（Abmole M9383）是一種首創(chuàng)的（first-in-class），口服活性的，鞘氨醇激酶-2（SK2）選擇性抑制劑，具有抗癌、抗炎癥、抗病毒（COVID-19和SARS-CoV-2）活性。

更多詳情可參見 https://www.abmole.cn/products/opaganib.html

線粒體功能障礙是氧化應激的一個標志，因此我們通過檢測MMP和mtROS水平來評估LPS處理的巨噬細胞的線粒體功能。我們發(fā)現(xiàn)，在LPS暴露的巨噬細胞中，SPHK2的下調(diào)顯著恢復了被破壞的MMP，并減弱了mtROS的釋放（圖3A, B）。然后，為了研究SPHK2是否可以調(diào)節(jié)NLRP3炎癥小體的激活，我們分析了LPS暴露后SPHK2與NLRP3表達水平的相關性。如圖3C所示，qRT-PCR結(jié)果顯示SPHK2和NLRP3的mRNA表達呈正相關。Western blot分析也顯示SPHK2活性與NLRP3蛋白表達呈正相關（圖3D）。

此外，免疫印跡和免疫熒光圖像均顯示NLRP3、ASC和cleaved caspase-1的積累（也通過ELISA檢測;由LPS誘導的S1C）通過下調(diào)SPHK2而被基本消除（圖3E, F）。通過使用ABC294640在人源性單核細胞THP-1中也證明了類似的現(xiàn)象。綜上所述，這些結(jié)果表明，SPHK2在LPS觸發(fā)的氧化應激和巨噬細胞NLRP3炎性小體激活中發(fā)揮了積極作用。

為了確定在體內(nèi)阻斷SPHK2活性是否可以改善LPS誘導的肺損傷，對肺組織進行了組織學檢查。與受載物刺激的小鼠相比，感染后6小時ABC294640治療明顯減輕了LPS誘導的肺損傷，表現(xiàn)為出血減少和肺泡壁厚度減?。▓D6A）。同時定量各組肺損傷評分。與組織學檢查結(jié)果一致，與LPS組相比，ABC294640處理組評分趨于降低（圖6B）。

此外，與對照處理組相比，ABC294640處理小鼠LPS引發(fā)的組織損傷、炎癥細胞浸潤以及BALF蛋白濃度均顯著降低（圖6C, D）。需要強調(diào)的是，LPS誘導的肺損傷與氧化應激有關。因此，為了檢測LPS暴露后肺組織氧化應激水平，測定了SOD、MPO和MDA的含量。

研究發(fā)現(xiàn)暴露于LPS的小鼠SOD含量降低，MPO活性和MDA水平升高。盡管如此，與LPS組相比，ABC294640治療改善了肺組織的氧化損傷（圖6E-G）。

由于巨噬細胞被認為是ALI發(fā)病的主要因素，我們想知道抑制SPHK2活性是否會影響體內(nèi)LPS暴露時巨噬細胞的行為變化。如圖7A-C所示，ABC294640處理可減少LPS暴露后F4/80+巨噬細胞向肺組織的浸潤。此外，阻斷SPHK2活性可明顯誘導M2巨噬細胞極化。然后我們用qRT-PCR檢測了ABC294640對肺組織炎癥介質(zhì)水平的影響。

結(jié)果顯示，ABC294640處理明顯抑制LPS誘導的炎癥因子的積累（圖7D）。根據(jù)上述結(jié)果，我們的數(shù)據(jù)揭示了抑制SPHK2可以緩解巨噬細胞誘發(fā)的肺組織氧化損傷和炎癥反應。

接下來，通過免疫印跡和免疫組化染色檢測肺組織中p53乙?；蚇LRP3炎癥小體活化水平。與體外實驗結(jié)果一致，體內(nèi)數(shù)據(jù)表明，單獨使用LPS可顯著提高乙?；痯53蛋白水平。然而，ABC294640處理可以降低p53乙?；▓D8A）。如圖8B所示，NLRP3在LPS暴露小鼠的AMs中高表達。

相比之下，免疫組化染色顯示，暴露于ABC294640處理的LPS小鼠的AMs中NLRP3略有染色。對肺組織樣本進行Western blotting，進一步檢測NLRP3炎性小體的激活。LPS攻毒小鼠肺組織NLRP3、ASC和活化caspase-1水平均較PBS組上調(diào)。此外，ABC294640可顯著降低NLRP3、ASC和cleaved-caspase-1的表達水平（圖8C、D）。

總之，研究表明，在體外和體內(nèi)實驗中，敲除或抑制SPHK2可通過調(diào)節(jié)p53乙?；讲糠忠种芁PS誘導的NLRP3炎癥小體激活和巨噬細胞中隨后的炎癥反應（圖8E）。

鳴謝：Linjing Gong, et al. Cell Death Discov. 2023 Jan 18;9(1):12.