一.流動相中加入四氫呋喃對柱子有損害嗎?我現(xiàn)在分析一樣品流動相中用到20%的四氫呋喃才能把峰分到基線.但柱子只能用一個星期分離效果就不好了.請問是四氫呋喃損壞了柱子嗎?

? ? ? ?答：四氫呋喃（THF）是反相色譜中洗脫能力極強的溶劑，比甲醇和乙腈都強很多。在流動相中加入THF能改善某些難分離的物質(zhì)對的分離度。但THF不穩(wěn)定，容易降解生成具有很強反應(yīng)活性的過氧化物，能與分析物反應(yīng)生成新化合物，導(dǎo)致拖尾、峰分裂和鬼峰產(chǎn)生。高反應(yīng)活性的過氧化物還可以和填料固定相發(fā)生化學(xué)作用，THF對柱子有損傷這點是無疑的，而且這種損傷是隨時間累積的。THF保質(zhì)期一般規(guī)定是6個月，放得越久，里面產(chǎn)生的過氧化物含量越大，你應(yīng)該避免使用生產(chǎn)日期已很久的THF溶劑，而且最好將THF冷藏、干燥和避光保存，使用前最好能檢測一下過氧化物的含量。

二.在用液相色譜同時分離多種組分時，怎么通過條件色譜條件使各個峰達到比較理想的分離效果？

? ? ? ?答：這是方法開發(fā)的大問題。方法開發(fā)建立，要做的就是：針對分析物和基體的情況不同，選擇色譜柱類型和分析條件，包括流動相溶劑類型、組成比例、pH值、溫度和流速等參數(shù)的確定。這方面的問題，要講起來內(nèi)容非常多。

三.是樣品過載問題,按藥典檢測方法檢驗一些藥品有關(guān)物質(zhì)時,都要注入高濃度的供試液,這樣往往使得柱過載而峰變形,按老師的方法減小濃度和注入量均是不允許的,怎么處理這問題?

? ? ? ?答：藥典方法中注入高濃度供試液測定有關(guān)物質(zhì)，提高注入濃度是為了把雜質(zhì)峰的信號增強。有時候為了把雜質(zhì)峰顯現(xiàn)出來，主峰因過載有所變形，如在允許范圍內(nèi)，也能接受。但前提是雜質(zhì)峰和樣品主峰分開，如果因過載而使兩峰沒有得到需要的分離度，雜質(zhì)峰信號再強也失去了意義。我認為藥典規(guī)定的條件是允許在一定范圍內(nèi)進行調(diào)節(jié)的，因為藥典沒有規(guī)定具體使用色譜柱的品牌，而不同品牌的柱子，上樣量是有差異的。對色譜條件微調(diào)，并取得到了很好的分析結(jié)果，如果規(guī)定不允許，那你首先要懷疑這個規(guī)定是否合理，或者是否對規(guī)定的理解有問題。

四.哪些原因會造成色譜峰變寬、峰高變低，有哪些解決辦法？

? ? ? ?答：確實是這樣，如果其它色譜條件沒有改變，柱效下降是導(dǎo)致峰變寬的主要原因。對于易電離的極性物質(zhì)，如果流動相pH選擇不合適，分析物既有中性分子態(tài)存在，又有離子態(tài)存在，峰也會變寬變矮。

? ? ? ?色譜柱使用后柱效逐步下降是正?，F(xiàn)象，如突然降低則屬異常。柱效下降原因有很多，但柱效快速下降則多半是使用不當(dāng)，造成填料特性或柱床結(jié)構(gòu)改變所致。如超過使用pH范圍造成的固定相和硅膠基體的流失、柱床塌陷等；還有強保留物質(zhì)吸附在填料表面，形成非特異性吸附層，完全改變了原有固定相的表面活性和分離性能，使柱效下降；另外進樣時的壓力脈沖，也會破壞柱床結(jié)構(gòu)影響柱效。

五.我以前做蘇丹紅用的是安捷倫的SB-C18柱，峰形什么都很好，最近發(fā)現(xiàn)4個標(biāo)樣峰后都帶有一個小峰，一開始以為是標(biāo)樣問題，后來換XDB-C18后標(biāo)樣又正常了。可是用SB-C18柱做其他用正常，不知怎么回事？還有，像這種C18柱如果壓力過高能不能反沖，該如何沖洗？一般做獸殘、農(nóng)殘什么的，而且感覺三聚氰胺做后壓力更易增高，且容易引發(fā)進樣器漏等問題，請問做完三聚氰胺需對系統(tǒng)做特殊清洗嗎？

? ? ? ?答：用SB柱，標(biāo)樣后帶一小峰，而且是只對蘇丹紅標(biāo)樣測定時有，估計和蘇丹紅標(biāo)樣的測定方法和其它樣品測定方法不同有關(guān)。最好能把譜圖貼上來看看，是什么樣的小峰？才能判斷是溶劑峰還是雜質(zhì)峰。XDB柱和SB柱是有區(qū)別的，XDB鍵合度高，封尾良好，反相保留能力強；而SB柱，未進行封尾，對極性物質(zhì)選擇性好。有可能你的蘇丹紅標(biāo)樣分解了，有極性雜質(zhì)生成，SB柱能把雜質(zhì)分開，而XDB柱不能。

? ? ? ?這兩款柱子壓力大了，可以反沖。有正常維護時的反沖沖洗和再生時的強溶劑沖洗兩種，沖洗方法在在線講座里也寫了，你再回到本貼的前面看看就可以了。

? ? ? ?三聚氰胺和三乙胺類似，本身容易和硅醇基作用而吸附在填料表面，另外三聚氰胺測定的樣品基體含蛋白類的強保留物質(zhì)較多，容易污染色譜柱柱頭引起填料間隙堵塞柱壓升高，最好每次做完樣后，都用甲醇或乙腈反向清洗維護一下。如有蛋白類的污染，也定時用本講座中提到的清洗方法做一下維護。

總結(jié)

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