TALEN

Transcription Activator-like Effector Nucleases (TALENs) 轉(zhuǎn)錄激活樣效應(yīng)因子核酸酶是具有序列特異性的限制性內(nèi)切酶，通過融合類轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物（TALE）的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)崿F(xiàn)DNA雙鏈的斷裂，借助宿主細胞DNA修復(fù)機制，通過同源重組或非同源性末端連接 (NHEJ)進行DNA修復(fù)，從而產(chǎn)生Indel基因編輯效果。

TALE(TAL effectors，類激活因子效應(yīng)物)是植物病原菌黃單胞菌(Xanthomonas)自然分泌的蛋白，能夠識別特異性DNA堿基對。

CRISPR/Cas9

根據(jù)Cas蛋白質(zhì)和參與序列的不同，將目前發(fā)現(xiàn)的CRISPR/Cas系統(tǒng)分為Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。其中，Ⅰ型和Ⅲ型需要多種Cas蛋白共同發(fā)揮作用，而Ⅱ型由Cas9單獨參與，是研究較為深入的一種類型。

在pre-crRNA轉(zhuǎn)錄的同時，與其重復(fù)序列互補的反式激活crRNA（trans-activating crRNA，tracrRNA）也轉(zhuǎn)錄出來。Cas9首先與crRNA和tracrRNA結(jié)合形成復(fù)合物，此復(fù)合物通過與PAM序列結(jié)合并侵入DNA，形成RNA-蛋白-DNA復(fù)合結(jié)構(gòu)，進而在與crRNA配對的序列靶點剪切雙鏈DNA。

通過人工設(shè)計這兩種RNA，可以改造形成具有引導(dǎo)作用的sgRNA（single guide RNA），通過將表達sgRNA的元件與表達Cas9的元件相連接，得到可以同時表達兩者的質(zhì)粒，便能夠?qū)δ康幕蜻M行操作，以引導(dǎo)Cas9對DNA的定點切割。

TALEN & CRISPR Cas9的區(qū)別