劉老師周六小課堂之《劉老師細(xì)說(shuō)膜片鉗》答疑
1.??Holding電壓的設(shè)置只跟靜息膜電位有關(guān)系嗎?跟記錄內(nèi)液有關(guān)系嗎?
答:靜息膜電位與內(nèi)液有關(guān)系,holding的設(shè)置目的:(1)隨后打破細(xì)胞膜時(shí),使細(xì)胞盡可能處于靜息狀態(tài),一般holding設(shè)在靜息膜電位附近;(2)超極化的holding有助于封接。所以holding的設(shè)置與靜息膜電位有關(guān)。
2.?鈉、鉀離子的內(nèi)向、外向整合電流是怎么回事呀?一直對(duì)這個(gè)感到很困惑
答:內(nèi)、外向整流是離子通道的性質(zhì),不是離子的性質(zhì)!整流是指隨著膜電位去極化,通道電流的變化偏離歐姆定律(即I-V關(guān)系不符合直線關(guān)系)。內(nèi)向整流是指電流逐漸靠近I-V曲線的X軸,外向靠近Y軸。例如,外向整流性K離子通道,隨著膜電位的去極化,電流幅度越來(lái)越大,曲線偏向Y軸。
3. 如果不補(bǔ)償膜電容的話對(duì)記錄有什么影響呢?
答:影響是:(1)記錄的快速開(kāi)放的離子通道電流(如Na電流)會(huì)與Cm的充電電流混在一起,影響電流觀察;(2)后續(xù)對(duì)串聯(lián)電阻Rs的補(bǔ)償講不能進(jìn)行;(3)Cm充放電電流比較大,可能會(huì)使放大器輸入飽和,記錄的電流表現(xiàn)為“刀切”一樣,不僅不好看,而且常時(shí)間飽和會(huì)使放大器損傷。
4.“漏減”和“增益”是什么意思呢?
答:去除漏電流叫漏減(Leak subtraction)。增益(Gain)是放大倍數(shù),是輸出信號(hào)的放大,放大器上都可以設(shè)置放大倍數(shù)。
5.??700B補(bǔ)償漏電流后一直回不到基線怎么處理,有時(shí)補(bǔ)了漏電流后反而偏離基線更遠(yuǎn)?
答:700B的漏電流補(bǔ)償是執(zhí)行的右圖中紅圈內(nèi)的功能嗎?這個(gè)功能你可以看著Membrane Test中的方波自動(dòng)或手動(dòng)調(diào)節(jié),它不是將基線調(diào)零,而是使方波幅度為0。要想對(duì)漏電流進(jìn)行補(bǔ)償,要采用軟件的P/N漏減功能,而這個(gè)功能與記錄的基線無(wú)關(guān)。

6.??Axon holding current 應(yīng)該控制在多少以內(nèi)?
答:Holding current顯示的是用于維持Holding的鉗制電流,表現(xiàn)在基線偏離大小。我們可以計(jì)算一下:若holding = -70mV,Rm=500MΩ, 則holding current=140pA。所以大于140pA,則說(shuō)明Rm低于500MΩ。一般holding curerent應(yīng)小于200pA。