蛋白質(zhì)譜iTRAQ分析指的是同時利用iTRAQ標記技術(shù)和質(zhì)譜技術(shù)對蛋白質(zhì)進行分析的一種技術(shù)，主要用于定量蛋白質(zhì)組學分析中。

蛋白質(zhì)譜iTRAQ分析

蛋白質(zhì)譜iTRAQ分析指的是將iTRAQ標記技術(shù)和質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合對蛋白質(zhì)進行分析的一種分析技術(shù)。iTRAQ (Isobaric tag for relative and absolute quantitation)是由AB SCIEX公司開發(fā)的一種多肽體外標記技術(shù)。在定量蛋白質(zhì)組學中，iTRAQ采用多種同位素標簽（4種或8種），可以標記單個實驗中有不同來源的蛋白質(zhì)酶消化后的肽段N端，然后將這些肽段進行串聯(lián)質(zhì)譜分析，可同時比較多種不同來源中蛋白質(zhì)的相對和絕對含量。

蛋白質(zhì)譜iTRAQ分析原理

iTRAQ標簽主要由三部分構(gòu)成：報告基團，平衡基團和肽反應基團。其中，報告基團和平衡基團一起組成等重標簽。不同標簽的報告基團的重量不同，用于指示蛋白樣品的豐度水平。平衡基團則用于平衡報告基團的質(zhì)量差，使等重標簽重量一致，保證標記的同一肽段的m/z相同。肽反應基團則用于與肽段N端及賴氨酸側(cè)鏈氨基發(fā)生共價連接，從而標記上肽段。

在蛋白質(zhì)譜iTRAQ分析中，蛋白質(zhì)首先被裂解為肽段，然后用iTRAQ試劑進行差異標記。由于iTRAQ試劑是等量的，標記的同一多肽在第一級質(zhì)譜檢測中分子量是完全相同的，因此需通過第二級質(zhì)譜進行分析。在二級質(zhì)譜分析過程中，報告基團、平衡基團和多肽反應基團之間的鍵斷裂，平衡基團丟失，不同報告基團離子強度的差異就代表了它所標記的多肽的相對豐度。同時，多肽內(nèi)的酰胺鍵斷裂，得到碎片離子的質(zhì)量，通過數(shù)據(jù)庫查詢和比較，可以鑒定出相應的蛋白質(zhì)。