近日，《中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》刊發(fā)了【專家論壇】“臨床血脂檢測(cè)新技術(shù)及其應(yīng)用進(jìn)展”一文，文中介紹了垂直密度梯度離心、核磁共振波譜分析、液相色譜串聯(lián)質(zhì)、微流控芯片電泳技術(shù)譜等臨床血脂檢測(cè)的新技術(shù)，促進(jìn)了低密度脂蛋白、高密度脂蛋白顆粒濃度及脂蛋白亞型相關(guān)參數(shù)等新項(xiàng)目在動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、調(diào)脂治療療效監(jiān)測(cè)等方面的臨床應(yīng)用與推廣。

作者重點(diǎn)分析和介紹了包括微流控芯片電泳技術(shù)在內(nèi)的脂蛋白亞型檢測(cè)新技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用，希望能為臨床個(gè)體化、精準(zhǔn)化的血脂管理工作提供新思路。

目前，隨著低密度脂蛋白、高密度脂蛋白顆粒濃度及脂蛋白亞型等相關(guān)參數(shù)的臨床價(jià)值逐步得到認(rèn)可。包括垂直密度梯度離心（VAP）、核磁共振波譜分析（NMRS）、微流控芯片電泳技術(shù)等一系列新技術(shù)、新方法的日益成熟，促進(jìn)了更多血脂檢測(cè)新項(xiàng)目的臨床應(yīng)用與推廣，不僅有望改善現(xiàn)有ASCVD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估體系的預(yù)測(cè)能力，或還有利于調(diào)脂療效或新藥物安全性的判斷，進(jìn)而指導(dǎo)臨床個(gè)體化、精準(zhǔn)化的血脂管理。

血脂檢測(cè)新技術(shù)

1.VAP技術(shù)：VAP是基于密度梯度超高速離心方法分離脂蛋白，再利用特殊的表面活性劑使不同脂蛋白解離膽固醇，再通過(guò)膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶反應(yīng)在連續(xù)流動(dòng)的管路中實(shí)時(shí)檢測(cè)吸光度變化，從而獲得連續(xù)脂蛋白膽固醇圖譜；還可利用激光顆粒散射檢測(cè)技術(shù)，對(duì)超離法分離LDL組分顆粒數(shù)進(jìn)行定量，再獲得LDL顆粒濃度（LDL-P）。

基于VAP技術(shù)的全自動(dòng)血脂譜檢測(cè)體系，可報(bào)告血脂基本項(xiàng)目TC、TG、LDL-C和HDL-C，還包括極低密度脂蛋白（VLDL）及VLDL3亞型、中間密度脂蛋白（IDL）、LDL1~4亞型、Lp（a）、HDL2和HDL3亞型的膽固醇水平及LDL-P；另可報(bào)告非HDL膽固醇［即為VLDL、IDL、LDL1~4亞型和Lp（a）的膽固醇之和］、脂蛋白殘粒（RLP）膽固醇（即為VLDL3亞型和IDL的膽固醇之和）；且可提供真實(shí)的LDL-C水平結(jié)果（即為L(zhǎng)DL1~4亞型的膽固醇之和），而傳統(tǒng)LDL-C水平結(jié)果一般包括LDL 1~4亞型、IDL和Lp（a）的膽固醇之和。

2.NMRS：該技術(shù)屬于光譜學(xué)范疇，主要基于在強(qiáng)磁場(chǎng)中帶核磁性的分子或原子核吸收電磁輻射從低能態(tài)向高能態(tài)躍遷的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生共振譜，經(jīng)計(jì)算機(jī)數(shù)學(xué)模型轉(zhuǎn)換后，可用于分析混合相中的成分?jǐn)?shù)目、類型和相對(duì)位置；在臨床血脂成分檢測(cè)中，通過(guò)NMRS可測(cè)量脂蛋白顆粒表面磷脂、未酯化膽固醇及內(nèi)核中膽固醇酯、TG末端甲基集團(tuán)的質(zhì)子數(shù)量，從而確定脂蛋白及其亞型顆粒的質(zhì)量、數(shù)量和粒徑大小等特征。

基于NMRS技術(shù)的脂蛋白檢測(cè)，可報(bào)告脂蛋白顆粒的平均粒徑及5個(gè)VLDL亞型、6個(gè)LDL亞型、IDL、4個(gè)HDL亞型的顆粒濃度，另可提供各類脂蛋白及其亞型的TC、TG分布含量。

3.LC-MS/MS：該技術(shù)以高效液相色譜為分離手段、以質(zhì)譜為鑒定測(cè)量手段，是一種集高效分離和多組分定性、定量于一體的方法。基于LC-MS/MS的血脂分析，主要應(yīng)用于更小分子脂類化合物的檢測(cè)，不僅可作為臨床TC和TG檢測(cè)的參考方法，還能獲得個(gè)體完整的載脂蛋白譜，有望建立基于LC-MS/MS技術(shù)的載脂蛋白檢測(cè)參考方法，推進(jìn)臨床載脂蛋白檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程。

4.ES-DMA：該技術(shù)是離子淌度光譜（IMS）分析中的一種，先通過(guò)電噴霧接口霧化脂蛋白生成高電荷氣溶膠顆粒，再經(jīng)差分電遷移率分析測(cè)量不同大小、不同形狀顆粒遷移的平均速率，最后轉(zhuǎn)化為顆粒的粒徑分布和數(shù)量信息?；贓S-DMA技術(shù)的血脂分析，可報(bào)告完整的包括不同粒徑范圍脂蛋白的顆粒濃度。

5.微流控芯片電泳技術(shù)：該技術(shù)是在玻璃、石英、塑料等基片的微細(xì)通道中，以電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，借助離子或分子在納升級(jí)分子網(wǎng)篩媒介中電遷移或分配行為上的差異，對(duì)復(fù)雜樣品中的多組分進(jìn)行快速高效分離的分析手段。基于微流控芯片電泳技術(shù)可開(kāi)展LDL和HDL脂蛋白亞型分析，目前國(guó)內(nèi)已有針對(duì)HDL2b亞型的檢測(cè)儀器與試劑盒獲準(zhǔn)注冊(cè)。

• 血脂檢測(cè)新技術(shù)優(yōu)缺點(diǎn)比較見(jiàn)下表

血脂檢測(cè)新技術(shù)的臨床應(yīng)用

1.VAP技術(shù)：一項(xiàng)針對(duì)15397名健康個(gè)體的大型流行病學(xué)研究，通過(guò)VAP技術(shù)分析各脂蛋白亞型的膽固醇水平，同時(shí)采用IMS技術(shù)分析各脂蛋白亞型的顆粒濃度，旨在比較空腹和非空腹時(shí)各脂蛋白及其亞型檢測(cè)結(jié)果的差異，發(fā)現(xiàn)非空腹時(shí)VLDL的膽固醇水平和顆粒濃度均明顯高于空腹時(shí)結(jié)果，但是IDL和小而密LDL亞型的檢測(cè)結(jié)果則不受空腹或非空腹條件的影響。

國(guó)內(nèi)學(xué)者以VAP報(bào)告的真實(shí)LDL-C水平作為參考標(biāo)準(zhǔn)，比較了中國(guó)人群采用Friedewald、Martin-Hopkins、Vujovic和Sampson公式計(jì)算的LDL-C結(jié)果在空腹和餐后條件下的差異，發(fā)現(xiàn)空腹時(shí)由Friedewald公式計(jì)算的LDL-C結(jié)果與VAP報(bào)告的真實(shí)LDL-C水平一致，而Sampson公式則是餐后條件下計(jì)算LDL-C結(jié)果的更優(yōu)選擇。另一項(xiàng)研究顯示，采用VAP技術(shù)檢測(cè)餐后脂蛋白亞型參數(shù)，在識(shí)別中或高ASCVD風(fēng)險(xiǎn)人群方面的分層價(jià)值并不亞于常規(guī)空腹血脂檢測(cè)。

2.NMRS技術(shù)：有研究通過(guò)NMRS技術(shù)分析青春期至成年期的血清脂蛋白特征，發(fā)現(xiàn)休閑時(shí)間體育活動(dòng)與VLDL顆粒大小、濃度及其TG含量呈負(fù)相關(guān)，與HDL顆粒大小、濃度及其TC濃度呈正相關(guān)；該結(jié)果支持了關(guān)于青少年體育活動(dòng)的建議，以促進(jìn)健康并降低潛在的ASCVD風(fēng)險(xiǎn)。在常規(guī)血脂正常的肥胖青少年中，通過(guò)NMRS技術(shù)檢測(cè)的LDL-P特別是小LDL亞型顆粒濃度能可靠反映其心臟受累嚴(yán)重程度、合并代謝綜合征等情況；可見(jiàn)NMRS血脂分析能為ASCVD早期預(yù)防或血脂管理提供更多有效信息。

跟蹤LDL和HDL顆粒中脂質(zhì)成分TC、TG分布的細(xì)微變化，有助于一般人群或健康個(gè)體的ASCVD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。一項(xiàng)匯總4個(gè)大型隊(duì)列15 784名非ASCVD參與者的研究，對(duì)比了常規(guī)HDL-C和NMRS技術(shù)檢測(cè)的HDL-P分別對(duì)缺血事件綜合結(jié)局方面的預(yù)測(cè)價(jià)值，隨訪8~12年，發(fā)現(xiàn)基線HDL-P在總體人群中始終與心肌梗死、缺血性腦卒中的個(gè)體終點(diǎn)呈負(fù)相關(guān)，比HDL-C更具價(jià)值。

3.LC-MS/MS技術(shù)：在直接定量分析血清各類載脂蛋白方面，LC-MS/MS技術(shù)應(yīng)用已較成熟。近年來(lái)靶向降低Lp（a）水平是臨床調(diào)脂治療研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)問(wèn)題，有研究通過(guò)LC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)了接受他汀類藥物治療后Lp（a）仍高和不高患者的載脂蛋白（a）［Apo（a）］水平差異，并結(jié)合電泳和蛋白免疫印跡結(jié)果計(jì)算了Apo（a）的產(chǎn)生率和分解代謝率，發(fā)現(xiàn)經(jīng)他汀治療后Lp（a）顆粒濃度仍高可能是其肝臟生成增加的結(jié)果，這為靶向Apo（a）合成的調(diào)脂策略提供了動(dòng)力學(xué)依據(jù)；另有研究利用LC-MS/MS技術(shù)發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充ω-3脂肪酸可降低接受他汀類藥物和/或依折麥布治療的家族性高膽固醇血癥患者餐后富含TG脂蛋白中的Apo（a）水平，這為ω-3脂肪酸在TG和Lp（a）升高患者中的代謝作用提供了新見(jiàn)。

4.ES-DMA/IMS技術(shù)：通過(guò)IMS分析脂蛋白及其亞型顆粒濃度有助于識(shí)別胰島素抵抗個(gè)體，與TG/HDL-C的組合可進(jìn)一步改善單一指標(biāo)對(duì)胰島素抵抗的預(yù)測(cè)能力。一項(xiàng)針對(duì)2型糖尿病患者為期2年的營(yíng)養(yǎng)性酮癥隨機(jī)對(duì)照臨床試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)極低碳水化合物飲食誘導(dǎo)的營(yíng)養(yǎng)性酮癥可降低患者小LDL亞型顆粒濃度、升高較大LDL亞型顆粒濃度，但對(duì)總LDL-P、ApoB及頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度進(jìn)展均無(wú)影響；可見(jiàn)利用IMS技術(shù)檢測(cè)脂蛋白及其亞型顆粒濃度，能為2型糖尿病患者的飲食管理提供指導(dǎo)意見(jiàn)。

5.微流控芯片電泳技術(shù)：通過(guò)該技術(shù)開(kāi)展的臨床應(yīng)用研究近年多為針對(duì)HDL亞型的檢測(cè)分析。國(guó)內(nèi)學(xué)者通過(guò)微流控芯片電泳技術(shù)平臺(tái)發(fā)現(xiàn)高水平HDL3和低水平HDL2b百分比與隊(duì)列人群中代謝不健康或肥胖狀態(tài)有關(guān)；其中HDL2b顆?？赡芡ㄟ^(guò)負(fù)調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞活化來(lái)發(fā)揮了抗炎作用，有望作為未來(lái)代謝疾病的潛在治療靶點(diǎn)。另有報(bào)道采用微流控芯片電泳技術(shù)發(fā)現(xiàn)多囊卵巢綜合征患者的血清HDL2b百分比降低，這可能是增加其動(dòng)脈粥樣硬化以及冠心病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的重要因素。

目前，國(guó)盛醫(yī)學(xué)利用自主專利技術(shù)開(kāi)發(fā)出全球獨(dú)創(chuàng)的微流控芯片電泳技術(shù)，是全球首個(gè)獲批注冊(cè)證且適用于臨床的微流控產(chǎn)品。高密度脂蛋白（HDL）是顆粒最小的血漿脂蛋白，普通技術(shù)很難精細(xì)分離，而國(guó)盛醫(yī)學(xué)微流控芯片電泳技術(shù)采用國(guó)際領(lǐng)先的血脂蛋白分型技術(shù)——納升級(jí)反應(yīng)，把整個(gè)分析過(guò)程集成到微米尺度的芯片上，具有精準(zhǔn)、可靠、快速、便捷的特點(diǎn)，一次可完成12個(gè)樣本的檢測(cè)，并可在線實(shí)現(xiàn)樣品的自動(dòng)化判讀，是目前HDL亞組分分型的最優(yōu)平臺(tái)。后續(xù)高通量一次性檢測(cè)96個(gè)樣本的產(chǎn)品正在緊鑼密鼓研發(fā)中。

臨床血脂檢測(cè)是血脂異常防治和ASCVD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的重要組成部分?；赩AP、NMRS、IMS及LC-MS/MS等新技術(shù)、新方法的高級(jí)血脂分析策略，可提供更多、更全面的個(gè)體化血脂譜，進(jìn)一步促進(jìn)了脂蛋白顆粒濃度及各脂蛋白亞型、亞組分檢測(cè)的臨床應(yīng)用與推廣，有望提升ASCVD總體風(fēng)險(xiǎn)尤其是剩留風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的預(yù)測(cè)能力，進(jìn)而指導(dǎo)臨床對(duì)調(diào)脂治療方案的調(diào)整或優(yōu)化。

近年來(lái)隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展和多學(xué)科交叉的協(xié)同攻關(guān)，血脂檢測(cè)逐漸形成個(gè)體化、精準(zhǔn)化的綜合解決方案，旨在應(yīng)用更優(yōu)、更完整的血脂、脂蛋白及其亞型參數(shù)或者神經(jīng)酰胺、磷脂等脂類新指標(biāo)，開(kāi)發(fā)更自動(dòng)化、更高通量、更低價(jià)的血脂檢測(cè)體系平臺(tái)，致力于強(qiáng)化血脂篩查與管理的重要性，從而提高個(gè)體ASCVD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與分層的準(zhǔn)確性，最終改善ASCVD防治現(xiàn)狀，進(jìn)一步增加臨床獲益。

參考資料：

吳嘉 汪俊軍.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2023,46(7) : 660-666.