染料

+：添加程序

預(yù)變性-兩步法-溶解曲線-冷卻

設(shè)定兩步法溫度，根據(jù)引物tm，不高就55-60°C 即target

溶解曲線可預(yù)實(shí)驗(yàn)

操作注意：

加樣數(shù)不足96孔，放中間（有熱蓋）

樣品編輯：

制作標(biāo)曲，需要兩對(duì)引物—內(nèi)參基因+目的基因

type-standard標(biāo)準(zhǔn)品，制作標(biāo)曲

逆轉(zhuǎn)錄的cdna梯度稀釋，引物在不同模板濃度下擴(kuò)增

陰性對(duì)照：只有水

內(nèi)參：reference

分析——兩條標(biāo)曲

擴(kuò)增效率：一個(gè)模板經(jīng)過一個(gè)循環(huán)變成1-1.5

擴(kuò)增效率大ct值小

ct體現(xiàn)的擴(kuò)增效率的區(qū)別，

擴(kuò)增曲線（梯度稀釋曲線為間隔開的）

相對(duì)定量模板

內(nèi)參ct值比較小