蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測質(zhì)譜和IP
蛋白質(zhì)翻譯后修飾鑒定就是對蛋白質(zhì)翻譯后修飾的類型(所結(jié)合的官能基團(tuán)的種類)、修飾位點(diǎn)(結(jié)合官能基團(tuán)的氨基酸殘基種類和在肽鏈中所處的位置)以及修飾水平(有多少氨基酸殘基發(fā)生修飾)等進(jìn)行鑒定。在正常生理?xiàng)l件下,發(fā)生翻譯后修飾的蛋白質(zhì)含量相對較少,豐度較低,且處于動態(tài)變化之中,修飾與未修飾的蛋白質(zhì)也混合存在。因此,要進(jìn)行蛋白質(zhì)翻譯后修飾鑒定首先就要從蛋白質(zhì)混合物中分離出某一修飾類型的蛋白質(zhì),在進(jìn)行后續(xù)的鑒定。
免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)和質(zhì)譜檢測蛋白質(zhì)翻譯后修飾將免疫沉淀技術(shù)與質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合起來,可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)翻譯后修飾蛋白質(zhì)的獲取和后續(xù)鑒定兩部分工作。IP技術(shù)利用抗體與抗原特異性結(jié)合的原理可以將目標(biāo)蛋白從混合物中分離提取出來,因此可以用于從蛋白混合物中分離特定的翻譯后修飾蛋白。將能與目標(biāo)翻譯后修飾蛋白特異性結(jié)合的抗體與含有該修飾蛋白的混合液一起孵育,抗體與目標(biāo)修飾蛋白便相互識別并共價(jià)結(jié)合在一起,再通過洗脫技術(shù)即可以獲得目標(biāo)修飾蛋白。隨后,再利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(HPLC-MS)實(shí)現(xiàn)翻譯后修飾類型、修飾位點(diǎn)以及水平的鑒定。
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