大豆胰蛋白酶抑制因子檢測(cè)方法

豆胰蛋白酶抑制因子的檢測(cè),一般是用于動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)科學(xué)研究,因?yàn)榇蠖挂鹊鞍酌敢种埔蜃訉儆诖蠖怪械目範(fàn)I養(yǎng)因子,當(dāng)動(dòng)物采食未完全除去胰蛋白酶抑制劑的大豆飼料后,胰蛋白酶抑制劑一方面阻礙腸道內(nèi)蛋白水解酶的作用而使蛋白質(zhì)消化率下降,引起惡心、嘔吐等腸胃中毒癥狀;另一方面胰蛋白酶抑制劑還作用于胰腺本身,發(fā)生補(bǔ)償性反應(yīng),造成機(jī)能亢進(jìn),刺激胰腺分泌過(guò)多的胰腺酶,造成胰腺分泌的內(nèi)源性必需氨基酸缺乏,引起消化吸收功能失調(diào)或紊亂,嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)腹瀉,抑制機(jī)體生長(zhǎng)和造成胰臟腫大等現(xiàn)象。
大豆胰蛋白酶抑制劑(soybean trypsin inhibi-tor,STI)是一種多肽類或蛋白質(zhì)。它對(duì)植物本身具有保護(hù)作用,主要存在于大豆的子葉中,可防止大豆籽粒自身發(fā)生分解代謝,使種子處于休眠狀態(tài),能調(diào)節(jié)大豆蛋白的合成與分解,并具有抗蟲作用。然而大豆胰蛋白酶抑制劑具有抗?fàn)I養(yǎng)作用,主要表現(xiàn)在抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶活性、降低蛋白質(zhì)消化吸收和造成胰腺腫大。此外,它還具有一定的致敏性。首次報(bào)道有呼吸紊亂的大豆過(guò)敏患者血清中含有大豆胰蛋白酶抑制劑的特異性IgE抗體。胰蛋白酶抑制劑可分為Biwman Brik型抑制劑和Kunitz型抑制劑(如圖)


蛋白質(zhì)類蛋白酶抑制因子按其結(jié)構(gòu)組成分為:Kunitz胰蛋白酶抑制因子(KTI)和Bowan-Birk蛋白酶抑制因子(BBI),約占大豆種子蛋白質(zhì)干重的2%,在生大豆中的含量約為3%。KTI含量居多,生大豆抗?fàn)I養(yǎng)作用的40%來(lái)自于KTI。因此,KTI含量的高低在很大程度上決定了大豆所具有的抗?fàn)I養(yǎng)作用的強(qiáng)弱。胰蛋白酶抑制因子檢測(cè)(KTI)技術(shù)起著至關(guān)重要的作用。
發(fā)酵豆粕中胰蛋白酶抑制因子的測(cè)定,其原理是,胰蛋白酶可作用于底物苯甲酰一L-精氨酸對(duì)硝基苯胺(L-BAPA)結(jié)構(gòu)中精氨酸與對(duì)硝基苯胺的連接鍵,釋放出黃色的對(duì)硝基苯胺,該物質(zhì)在410nm有最大吸收值。大豆及其產(chǎn)品中的胰蛋白酶抑制劑可抑制這一反應(yīng),使吸光度值下降,其下降程度與胰蛋白酶抑制劑活性成正比。用分光光度法在410nm處測(cè)定吸光度值的變化,可對(duì)胰蛋白酶抑制劑活性進(jìn)行定量分析。
