YADA熒光探針;活細(xì)菌中肽聚糖標(biāo)記
YADA是一種綠黃色熒光黃基熒光D-氨基酸。 適用于標(biāo)記活細(xì)菌中的肽聚糖。 在合成過程中摻入細(xì)菌細(xì)胞壁。 表現(xiàn)出比其他 FDAA 大的斯托克斯位移和更寬的發(fā)射光譜,允許通過紫色光源激發(fā)并使用綠色濾光片檢測。 顯示出良好的水溶性、光穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性。 激發(fā)/發(fā)射 λ ~426/535 nm。
YADA性質(zhì)
M.Wt:459.41
Formula:C15H13N3O10S2
Solubility:Soluble to 100 mM in DMSO
Storage:Store at -20°C
CAS No:1471982-33-8
圖1:YADA光譜
制備儲備液 for YADA
以下數(shù)據(jù)基于產(chǎn)品分子量?459.41。由于水合程度的不同,批次的特定分子量可能因批次而異,這將影響制備儲備溶液所需的溶劑體積。選擇批次從而根據(jù)批次分子量重新計算:?
圖2:不同濃度YADA儲備液配制
YADA使用案例
圖3:分裂和伸長過程中細(xì)胞壁合成和水解率的 FDAA 測定。 (A) 為脈沖追蹤實驗觀察到的標(biāo)記模式的示意圖。新細(xì)胞壁材料用 HADA(藍(lán)色)標(biāo)記,而舊材料用 YADA(黃色)染色。 (B) 用 HADA 脈沖 2、4 和 8 分鐘后指示菌株的代表性圖像。在新 (C) 和舊 (D) PG 的分裂部位區(qū)域測量并歸一化綜合熒光強(qiáng)度。從這些強(qiáng)度測量中得出積分可得出 sPG 合成速率。數(shù)據(jù)符合二次指數(shù)方程(R 平方 > 0.9)。 (E) 隔膜 PG 水解率來自計算 YADA 熒光強(qiáng)度隨時間的減少,與追蹤前固定的細(xì)胞相比(時間點 0 分鐘,D)。 (F) 由于較早時間點的低信號強(qiáng)度,8 分鐘后測量了新細(xì)胞壁材料的側(cè)壁摻入(HADA 熒光強(qiáng)度)。 (G) sPG 和側(cè)壁合成之間的比率是通過除以 8 分鐘脈沖后每個的平均 HADA 熒光強(qiáng)度來計算的。所有數(shù)據(jù)均表示為平均熒光強(qiáng)度。誤差線表示 95% 的置信區(qū)間。所有值都是任意熒光強(qiáng)度單位,并除以 1000 用于繪圖目的。 (A) 中的比例尺 = 2 μm。