AF 555標記試劑盒設(shè)計用于直接從含有游離氨基的蛋白質(zhì)、肽和其他配體制備555。AF 555偶聯(lián)試劑盒提供了一種簡單快速的方法標記抗體、蛋白質(zhì)、多肽等含有游離氨基的樣本。AF 555偶聯(lián)試劑盒應(yīng)用于偶聯(lián)標記。

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艾美捷AF 555偶聯(lián)試劑盒：

Cat #: D-AKE520/D-AKE530/D-AKE540/D-AKE560/D-AKE580

Size: 100?μg*3

Storage: Stored at -20°C for 6 months, protected from light

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AF 555偶聯(lián)試劑盒供應(yīng)材料和儲存條件：

注：純化柱適用于分子量在100KD至200KD之間的樣品；如果試劑殘留，請及時密封并在-20°C下儲存

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樣品制備：

待標記樣品的初始濃度應(yīng)高于2 mg/mL。提示蛋白濃度在2.5mg/mL以上。否則，在實驗之前需要增加蛋白質(zhì)濃度。待標記樣品的成分（或儲存緩沖液）應(yīng)符合以下要求：

（1）不含氨基成分，否則會影響偶聯(lián)效果。

（2）?少量BSA不會影響偶聯(lián)效果。建議使用PBS作為存儲緩沖液。

（3）?如果樣品中含有可能干擾標記的物質(zhì)，建議用PBS代替緩沖液。具體方法如下

將樣品加入超濾膜中，加入200-150μL PBS。在12000 g、4°C、10分鐘的溫度下離心，然后濾出濾液。然后再次加入PBS，并在12000g，4°C，10分鐘下離心。離心后，取出超濾管的內(nèi)芯，將其置于干凈的外管中，并在4000g，4℃，2分鐘下離心以收集樣品

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操作步驟：

以下操作步驟基于3×100μg規(guī)格。對于其他規(guī)格，請相應(yīng)地調(diào)整日期。如果您需要調(diào)整體積，請保持樣品大小不變，并更改標記系統(tǒng)中的“FlyLink”“AF 488標記溶液、“Activated FlyLink”AF 488溶液和去離子水的體積。

1.將15μL FlyLink“”AF 488標記溶液加入待標記的樣品溶液中，并用移液管輕輕混合。

2.用移液管將7.5μL的Activated FlyLink“”AF 488溶液移到步驟1中的反應(yīng)溶液中，加入去離子水至150μL（注：此體積為標記系統(tǒng)），輕輕混合，在37°C的黑暗中靜置1h。

注：步驟1/2屬于標記步驟。

3.向步驟2中的反應(yīng)溶液中加入適量PBS（固定體積約為500μl），輕輕混合

將溶液移至純化柱。在4℃、12000g離心10分鐘。

4.丟棄濾液，向純化柱中加入適量PBS（固定體積約500μL）。

在4℃下以12000g離心10分鐘。

5.取出純化柱，將其倒置在干凈的離心管中，在4℃下以4000g離心2分鐘。

離心管中收集的溶液是偶聯(lián)產(chǎn)物。

注：步驟3/4/5為純化步驟。該偶聯(lián)物在4°C的黑暗中可以穩(wěn)定一個月以上。為了長期保存，綴合物應(yīng)裝在小份中，置于-20°C的黑暗中，并加入相同體積的甘油。避免重復(fù)冷凍和解凍。