艾美捷Protein A殘留檢測試劑盒是用來定量分析以抗體純化介質(zhì)protein A雜質(zhì)的試劑盒。

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背景資料：

在單克隆抗體藥物的純化過程中，以蛋白A（Protein A）為基礎(chǔ)的親合層析是廣泛應(yīng)用的純化方法之一，單克隆抗體可以有效的在此步驟中得到純化。蛋白A?的最初來源是細菌（Staphylococcus aureus）細胞壁中的一個蛋白質(zhì)，研究表明蛋白A?可能對人體有潛在的危害，它的生物學(xué)作用包括刺激人體多種細胞素（IFNγ, TNFα, IL-1α,IL-1β, IL-2, IL-4）的釋放。由于在蛋白A?親合層析柱使用過程中會有微量的蛋白A?從層析柱上脫落下來，因此用靈敏的方法來確證單克隆抗體藥物中蛋白A?的殘留處于一個較低的和穩(wěn)定的水平是單克隆抗體藥物的質(zhì)量標準之一。

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蛋白A (Protein A)?酶聯(lián)檢測試劑盒是用來定量分析生物藥物中蛋白A雜質(zhì)的試劑盒。首先，用不同濃度的蛋白A標準蛋白制作一條標準曲線，然后再根據(jù)標準曲線來分析生物藥物中殘留蛋白A的含量。

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具體方法為：先將蛋白A標準蛋白或者待測樣品適當稀釋后加入已包被好抗蛋白A抗體的96孔平板中。經(jīng)過1.5小時的保溫，蛋白A與已經(jīng)固定在平板上的抗體結(jié)合形成抗原－抗體復(fù)合物。此復(fù)合物被隨后加入的生物素標記的抗蛋白A的抗體結(jié)合并進一步形成更高級的復(fù)合物，反應(yīng)45分鐘后洗去未結(jié)合的物質(zhì)。再加入鏈霉親合素-辣根過氧化物酶復(fù)合物（Streptavidin-HRP Conjugate），靜置30分鐘。因鏈霉親合素可以與任何帶生物素標記的抗體相結(jié)合，從而使鏈霉親合素-辣根過氧化物酶復(fù)合物連接到平板上。接下來沖洗掉未結(jié)合的物質(zhì)，加入TMB底物。固相上的酶催化底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，待顏色反應(yīng)一段時間后，終止反應(yīng)。用酶標儀在450 nm波長下測定其結(jié)果，此結(jié)果能間接地反應(yīng)結(jié)合到平板上的蛋白A數(shù)量的多少。根據(jù)蛋白A標準曲線定量分析生物藥物中殘留蛋白A的含量。

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艾美捷Protein A殘留檢測試劑盒：

Protein A ELISA kit

編號：ADI-900-057

規(guī)格：96 Wells（可做37個樣本?。?/p>

樣本類型：含有天然或者重組Protein A的中性緩沖液（無物種限制）

檢測方法：比色法，450 nm

組分：Microtiter plate, Conjugate, Antibody, Assay buffer 13, Wash buffer concentrate,Standard, TMB Substrate, Stop solution 2

保存條件：藍冰運輸；收到貨后4℃保存（切勿冰凍）

僅用于科研實驗.

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艾美捷Protein A殘留檢測技術(shù)信息說明：

對來自金黃色葡萄球菌(M)的天然蛋白?A、來自大腸桿菌(R)?的重組蛋白?A、來自大腸桿菌(G)的重組半胱氨酸蛋白?A和重組耐堿蛋白?A的不同蛋白?A?構(gòu)建體的檢測識別對來自大腸桿菌(S)?的變體進行了測試，所得濃度從試劑盒標準曲線中插值并顯示在所提供的圖中。

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圖：煮沸后不同蛋白?A?構(gòu)建體的測定識別。從試劑盒標準曲線內(nèi)插得到的濃度。通過將觀察到的濃度除以預(yù)期濃度來計算回收率百分比。A：來自金黃色葡萄球菌(Millipore)的天然蛋白A，n=9；B：來自大腸桿菌(Repligen)的重組蛋白A，n=9；C：來自大腸桿菌(GE)的重組半胱氨酸蛋白A?，n=12；D：來自大腸桿菌的重組抗堿性蛋白?A?變體（來自?GE?的?MabSelet SuRe），n = 12；圖形數(shù)據(jù)代表統(tǒng)計平均值?+/- 1?標準偏差。

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