一、外泌體背景介紹

外泌體（Exosomes）是細(xì)胞外囊泡（Extracellular vesicles, EVs）的一種，大小在30-150nm，廣泛存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁等。參與細(xì)胞間物質(zhì)運輸與信息傳遞，調(diào)控細(xì)胞生理活動。?

二、外泌體分離和鑒定服務(wù)

???外泌體的分離

外泌體的樣本來源主要有細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清/血漿、尿液、腹水、乳汁、腦脊液、唾液、滑液等，其中細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清/血漿、尿液是最常見的來源。如果是使用細(xì)胞培養(yǎng)上清，要注意細(xì)胞培養(yǎng)中一定不能添加 FBS。

外泌體分離方法有很多種，包括超速離心、過濾離心、密度梯度離心、免疫磁珠和商用試劑盒。但是這么多方法中，我們通常推薦選用超速離心法進行提取和分離，因為超速離心方法得到的外泌體不管是從得率還是純度上都比較好。其他方法的特點如下：

? 過濾離心：得率比較低。

??密度梯度離心：步驟繁瑣，得率較低。

??免疫磁珠：特異性比較高，得率較低。

??商用試劑盒：價格高，效果一般。分離出的外泌體電鏡和粒徑效果差。

超速離心法是目前價格適中、得率和純度都能兼得的一種方法。

???外泌體的鑒定

外泌體分離之后，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物，多角度進行鑒定。

??透射電鏡鑒定法：簡稱TEM，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。

??納米顆粒跟蹤分析法：簡稱NTA，該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度快，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。

? Western blot分子標(biāo)志物檢測：外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如CD9、CD63和CD81；細(xì)胞質(zhì)蛋白，如肌動蛋白（Actin）和鈣磷脂結(jié)合蛋白（Annexins）；參與生物功能的分子，如凋亡轉(zhuǎn)接基因2互作蛋白X（ALIX）、腫瘤易感基因101蛋白（TSG101）、熱休克蛋白（HSP70、HSP90），以及細(xì)胞分泌的特異性蛋白。

?? 外泌體高通量檢測服務(wù)

外泌體內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)和核酸，可以運輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等進入受體細(xì)胞，參與細(xì)胞間通訊。不同細(xì)胞來源的外泌體所含有的蛋白成分和RNA不太相同，可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物，也能作為靶向藥物的載體進行疾病治療。中科普瑞利用平臺優(yōu)勢，為廣大客戶提供『外泌體高通量檢測服務(wù)綜合解決方案』。

中科普瑞外泌體高通量檢測服務(wù)內(nèi)容：

??外泌體全轉(zhuǎn)錄組測序服務(wù)

??外泌體lncRNA測序服務(wù)

??外泌體circRNA測序服務(wù)

??外泌體mRNA測序服務(wù)

??外泌體miRNA測序服務(wù)

??外泌體芯片檢測服務(wù)（ceRNA芯片）