動物細胞培養(yǎng) 【選必三】|0基礎(chǔ)救星!

自己從書上摘抄的筆記,希望對你們也有點用處。
1、細胞貼壁與接觸抑制:懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上,稱為細胞貼壁。當(dāng)細胞貼壁分裂生長到表面相互接觸時,細胞就停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為接觸抑制。
先有“細胞貼壁”再有“接觸抑制”
2、原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng):
原代培養(yǎng):動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng),原代培養(yǎng)的細胞核型正常。
傳代培養(yǎng):貼滿瓶壁的細胞需要重新用胰蛋白酶等處理,然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng),讓細胞繼續(xù)增殖。這樣培養(yǎng)的過程通常被稱為傳代培養(yǎng)。一般情況下,細胞在傳至10~50代作業(yè)時,增殖會逐漸緩慢,以至于完全停止,這時部分細胞的細胞核型可能會發(fā)生變化。
3、由于能保持正常的二倍體核型,供體細胞一般選用傳代培養(yǎng)十代以內(nèi)的細胞。
4、動物組織培養(yǎng):
過程:取動物組織塊剪碎,用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞后放入適宜培養(yǎng)液形成細胞懸液后讓細胞增殖進行原代培養(yǎng)或傳代培養(yǎng)。
5、動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核,移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中,使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎,這個新的胚胎最終發(fā)育成為動物體。
6、動物細胞融合也稱細胞雜交,是指兩個或多個動物細胞結(jié)合形成一個細胞的過程,融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞,稱為雜交細胞。
誘導(dǎo)方法:生物誘導(dǎo)方法(滅活的病毒),化學(xué)誘導(dǎo)方法(聚乙二醇),物理誘導(dǎo)方法(電激法)
7、當(dāng)原代培養(yǎng)中細胞不能增殖時,可以分裝到新的培養(yǎng)瓶中進行傳代培養(yǎng),使其繼續(xù)增殖。
8.動物細胞培養(yǎng)
原理:細胞增殖
過程:

培養(yǎng)條件:
a.無菌無毒的環(huán)境:對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理;添加一定的抗生素;定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物。
b.營養(yǎng):除正常的有機和無機營養(yǎng)外,還需加入血漿,血清等一些天然成分。(原因:人們對細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚加入血清能使動物細胞正常生長增殖)
c.溫度和PH:適宜溫度為36.5攝氏度左右(哺乳動物);ph為7.2~7.4(多數(shù)細胞)
d.氣體環(huán)境:95%空氣和5%PH(維持營養(yǎng)液PH)
9.胚胎干細胞:
哺乳動物的胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞,是由早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細胞。
在形態(tài)上,表現(xiàn)為體積小,細胞核大核仁明顯
在功能上,具有發(fā)育的全能性
意義:ES細胞的分離和培養(yǎng)成功是胚胎工程中的重大成就之一
10.ES細胞在體外培養(yǎng)的條件下,能夠維持不分化的狀態(tài)
11.在培養(yǎng)液中加入分化誘導(dǎo)因子,如:?;撬?,丁酰環(huán)腺苷酸等化學(xué)物質(zhì)時就可以誘導(dǎo)ES細胞向不同類型的組織細胞分化
12.獲能的精子和培養(yǎng)成熟的卵子,一般情況下都可以在獲能溶液或專用的受精溶液中完成受精過程
13.飼養(yǎng)層細胞一般為輸卵管上皮細胞,在干細胞培養(yǎng)時,可作為提供干細胞分裂、增殖的營養(yǎng)細胞
14.應(yīng)用:
