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動物細胞培養(yǎng) 【選必三】|0基礎(chǔ)救星!

2023-03-04 12:01 作者:星河溫柔宇宙  | 我要投稿

自己從書上摘抄的筆記,希望對你們也有點用處。

1、細胞貼壁與接觸抑制:懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上,稱為細胞貼壁。當(dāng)細胞貼壁分裂生長到表面相互接觸時,細胞就停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為接觸抑制。

先有“細胞貼壁”再有“接觸抑制”

2、原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng):

原代培養(yǎng):動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng),原代培養(yǎng)的細胞核型正常。

傳代培養(yǎng):貼滿瓶壁的細胞需要重新用胰蛋白酶等處理,然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng),讓細胞繼續(xù)增殖。這樣培養(yǎng)的過程通常被稱為傳代培養(yǎng)。一般情況下,細胞在傳至10~50代作業(yè)時,增殖會逐漸緩慢,以至于完全停止,這時部分細胞的細胞核型可能會發(fā)生變化。

3、由于能保持正常的二倍體核型,供體細胞一般選用傳代培養(yǎng)十代以內(nèi)的細胞。

4、動物組織培養(yǎng):

過程:取動物組織塊剪碎,用胰蛋白酶膠原蛋白酶處理分散成單個細胞后放入適宜培養(yǎng)液形成細胞懸液后讓細胞增殖進行原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)。

5、動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核,移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中,使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎,這個新的胚胎最終發(fā)育成為動物體。

6、動物細胞融合也稱細胞雜交,是指兩個或多個動物細胞結(jié)合形成一個細胞的過程,融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞,稱為雜交細胞。

誘導(dǎo)方法:生物誘導(dǎo)方法(滅活的病毒),化學(xué)誘導(dǎo)方法(聚乙二醇),物理誘導(dǎo)方法(電激法

7、當(dāng)原代培養(yǎng)中細胞不能增殖時,可以分裝到新的培養(yǎng)瓶中進行傳代培養(yǎng),使其繼續(xù)增殖。

8.動物細胞培養(yǎng)

原理:細胞增殖

過程:

培養(yǎng)條件:

a.無菌無毒的環(huán)境:對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理;添加一定的抗生素;定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物

b.營養(yǎng):除正常的有機和無機營養(yǎng)外,還需加入血漿,血清等一些天然成分。(原因:人們對細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚加入血清能使動物細胞正常生長增殖)

c.溫度和PH:適宜溫度為36.5攝氏度左右(哺乳動物);ph為7.2~7.4(多數(shù)細胞)

d.氣體環(huán)境:95%空氣和5%PH(維持營養(yǎng)液PH)

9.胚胎干細胞:

哺乳動物的胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞,是由早期胚胎原始性腺中分離出來的一類細胞。

形態(tài)上,表現(xiàn)為體積小,細胞核大核仁明顯

功能上,具有發(fā)育的全能性

意義:ES細胞的分離和培養(yǎng)成功是胚胎工程中的重大成就之一

10.ES細胞在體外培養(yǎng)的條件下,能夠維持不分化的狀態(tài)

11.在培養(yǎng)液中加入分化誘導(dǎo)因子,如:?;撬?,丁酰環(huán)腺苷酸等化學(xué)物質(zhì)時就可以誘導(dǎo)ES細胞向不同類型的組織細胞分化

12.獲能的精子和培養(yǎng)成熟的卵子,一般情況下都可以在獲能溶液專用的受精溶液中完成受精過程

13.飼養(yǎng)層細胞一般為輸卵管上皮細胞,在干細胞培養(yǎng)時,可作為提供干細胞分裂、增殖的營養(yǎng)細胞

14.應(yīng)用:


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