環(huán)狀RNA-SEC31A對胰腺癌細胞侵襲、遷移的影響及其機制研究Effects of circular RNA-SEC31A on the invasion and migration of pancreatic cancer cells and molecular mechanism

陰藝娜 蘇民 林梓航 陳亞鵬 陳汝福 李志花

中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院腫瘤內(nèi)科；廣東省人民醫(yī)院普外科

通信作者：李志花，Email：lzhdoct@163.com

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摘要

目的：明確環(huán)狀RNA-SEC31A（circSEC31A）在胰腺癌中的表達水平，探討其對胰腺癌細胞侵襲、遷移能力的影響及潛在的分子機制。

方法：采用實時熒光定量PCR檢測人正常胰腺細胞株HPDE及胰腺癌細胞株BXPC-3、PANC1、CaPan-2、SW1990 circSEC31A的表達水平，選用表達量較高的胰腺癌細胞株進行后續(xù)實驗。針對circSEC31A設(shè)計兩條siRNA(#1、#2)，采用脂質(zhì)體將siRNA轉(zhuǎn)染胰腺癌細胞沉默circSEC31A表達(siR-circSEC31A組)，以不針對circSEC31A設(shè)計的siRNA轉(zhuǎn)染胰腺癌細胞為對照組(siR-NC組)，Transwell實驗及劃痕實驗檢測circSEC31A對胰腺癌細胞侵襲、遷移能力的影響。采用circSEC31A探針及oligo陰性對照探針進行RNA Pull-down實驗，篩選與circSEC31A結(jié)合的miRNA，并驗證該miRNA對胰腺癌細胞侵襲、遷移的影響。熒光定量PCR檢測沉默miR-200c-3p及circSEC31A對胰腺癌細胞PDK1 mRNA表達的影響。蛋白質(zhì)印跡法檢測circSEC31A沉默對PDK1蛋白及下游相關(guān)蛋白Akt、磷酸化Akt(p-Akt)表達量的影響。

結(jié)果：胰腺正常細胞株HPDE circSEC31A表達量（1.000±0.120）顯著低于胰腺癌細胞株BXPC-3（1.920±0.130）、SW1990（2.93±0.528）、PANC1（4.557±0.692）和CaPan-2（5.247±0.194）的circSEC31A表達量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。Transwell實驗結(jié)果顯示，與PANC1 siR-NC組穿膜細胞數(shù)(1301.3±94.6)個/100倍視野和CaPan-2 siR-NC組穿膜細胞數(shù)(1835.0±70.1)個/100倍視野比較，PANC1 siR-circSEC31A#1組、siR-circSEC31A#2組和CaPan-2 siR-circSEC31A#1組、siR-circSEC31A#2組穿膜細胞數(shù)顯著下降，分別為(727.3±92.9)、(792.0±18.1)、(718.0±90.6)、(692.7±84.8)個/100倍鏡視野；劃痕實驗結(jié)果顯示，與PANC1 siR-NC組(55.000±4.359)%和CaPan-2 siR-NC組(69.000±3.606)%比較，PANC1 siR-circSEC31A#1組（20.667±3.215)%、siR-circSEC31A#2組(20.000±4.583)%和CaPan-2 siR-circSEC31A#1組(28.000±8.185)%、siR-circSEC31A#2組(29.667±5.686)%的劃痕區(qū)細胞覆蓋率顯著降低；RNA Pull-down實驗表明，與PANC1 oligo探針組(1.000±0.091)和CaPan-2 oligo探針組(1.000±0.153)比較，PANC1 circSEC31A探針組(2.237±0.175)和CaPan-2 circSEC31A 探針組(2.166±0.156)miR-200c-3p富集量顯著升高；與siR-NC組穿膜細胞數(shù)（939.3±57.0）、（786.7±51.5）個/100倍鏡視野比較，PANC1、CaPan-2細胞siR-miR-200c-3p組穿膜細胞數(shù)增加到（1206.0±99.1）、（1838.0±105.7）個/100倍視野，而siR-miR-200c-3p+siR-circSEC31A組穿膜細胞數(shù)又下降到（932.7±116.4）、（785.3±58.8）個/100倍鏡視野；與siR-NC組(1.000±0.103、1.000±0.107）比較，PANC1、CaPan-2細胞siR-miR-200c-3p組PDK1 mRNA表達量（1.898±0.159、2.102±0.337）顯著升高，而siR-miR-200c-3p+siR-circSEC31A組PDK1 mRNA表達量又顯著下降到（0.980±0.070、1.015±0.079）；蛋白質(zhì)印跡法結(jié)果顯示，PANC1 siR-NC組、 siR-circSEC31A#1組、siR-circSEC31A#2組PDK1蛋白表達量分別為0.767±0.086、0.281±0.191、0.333±0.062，CaPan-2 各組PDK1蛋白表達量分別為0.712±0.038、0.353±0.061、0.308±0.018；PANC1各組p-Akt蛋白表達量分別為0.741±0.050、0.114±0.027、0.139±0.041，CaPan-2 各組p-Akt蛋白表達量分別為0.823±0.052、0.141±0.045、0.280±0.089。siR-circSEC31A組PDK1、p-Akt蛋白表達量均顯著低于siR-NC組。以上各組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P值均＜0.05）。

結(jié)論：circSEC31A在胰腺癌細胞中高表達，通過介導(dǎo)miR-200c-3p/PDK1/Akt軸來促進胰腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移。circSEC31A可能成為胰腺癌患者早期診療潛在的新靶點。

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全文刊載于《中華胰腺病雜志》

2023年 第23卷 第2期 99-107頁

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全文閱讀

成熟的線狀mRNA是由最初轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物除去內(nèi)含子并將外顯子連接起來形成的一個連續(xù)的具有5′端帽子結(jié)構(gòu)和3′端poly A尾結(jié)構(gòu)的RNA分子。而環(huán)狀RNA（circular RNAs,circRNAs）則是由前體mRNA經(jīng)特殊的可變剪切，并通過3′剪接供體與5′剪接受體反向共價連接形成的具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的RNA分子。circRNAs作為一類不具有5′端帽子結(jié)構(gòu)和3′端poly A尾結(jié)構(gòu)的非編碼RNA，高度穩(wěn)定存在于生物體內(nèi)參與多種重要的生物學(xué)過程。近年來研究證實，circRNAs在多種腫瘤中異常表達，通過競爭性結(jié)合微小RNAs(microRNAs,miRNAs），使miRNAs與下游靶點mRNA“隔離”，進而間接調(diào)控下游基因的表達，在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用。SEC31A是外殼蛋白復(fù)合物Ⅱ（coat protein complexⅡ,COPⅡ）囊泡運輸系統(tǒng)的核心成分，已被認為與非小細胞肺癌的發(fā)病機制有關(guān)。circSEC31A是由SEC31A基因上的第17～21外顯子經(jīng)過反向剪切并首尾相接形成的閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的RNA分子。研究表明，circSEC31A通過調(diào)節(jié)miR-520a-5p/Got-2軸促進非小細胞肺癌細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致患者的不良預(yù)后。然而，有關(guān)circSEC31A在胰腺癌進展中的作用機制尚未見報道。本研究檢測胰腺癌細胞株circSEC31A表達，觀察circSEC31A對胰腺癌細胞侵襲、遷移能力的影響，并探討其具體的分子機制，以期為胰腺癌患者提供潛在的臨床治療靶點。

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資料與方法

一、細胞培養(yǎng)

人胰腺癌細胞株BXPC-3、SW1990、PANC1、CaPan-2和人正常胰腺細胞株HPDE均購自美國菌種保藏中心（ATCC）。復(fù)蘇后，PANC1、CaPan-2和SW1990細胞株采用10%FBS的DMEM培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)，BXPC-3和HPDE細胞株采用10%FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)。當(dāng)細胞生長密度達到70%～80%時，用0.25%胰酶消化并收集細胞進行傳代或進行下一步實驗。

二、胰腺癌細胞株circSEC31A、SEC31A mRNA表達檢測及circSEC31A鑒定

采用Trizol試劑提取癌細胞總RNA，用分光光度計測量RNA純度及濃度。取500ng總RNA，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，按照qRTPCR試劑盒行PCR擴增，檢測各細胞株circSEC31A及SEC31A的mRNA表達量。circSEC31A正向引物序列為5′-AATTTGTTGGCAGCTCAGGG-3′，反向引物序列為5′-TCTCAAAATTGCCCGTCAGC-3′；SEC31A mRNA正向引物序列為5′-CTTGGCTGCGAAGATGAGTC-3′，反向引物序列為5′-GAGCTGCTGTTTCTCGTACG-3′；以GAPDH為內(nèi)參。反應(yīng)條件：95℃ 30s，95℃ 5s、60℃ 20s，40個循環(huán)。由PCR儀自帶軟件獲取Ct值，通過公式2－ΔΔCt計算mRNA的相對表達量。

采用RNase R降解實驗和放線菌素D實驗對circSEC31A進行鑒定。

三、沉默circSEC31A胰腺癌細胞株的構(gòu)建及鑒定

針對circSEC31A反向剪切環(huán)狀位點設(shè)計兩條siRNA：siR-circSEC31A#1和siR-circSEC31A#2。siR-circSEC31A#1序列為AACCAGCACAUUAAA-GAGGAATT，siR-circSEC31A#2序列為UGACAACACCAACCAGCACAUTT。

采用脂質(zhì)體將siRNA轉(zhuǎn)染胰腺癌細胞(siR-circSEC31A組)，以不針對circSEC31A成環(huán)位點設(shè)計的siRNA轉(zhuǎn)染胰腺癌細胞作為對照組（siR-NC組），轉(zhuǎn)染48h后胰酶消化收獲細胞，采用qRT-PCR法驗證siRNA的敲低效率。

四、細胞侵襲實驗

細胞侵襲實驗采用Transwell小室。將融化的基質(zhì)膠按1∶4比例用無血清培養(yǎng)基稀釋后加入Transwell上室，待其凝固。取消化的胰腺癌細胞，重懸于DMEM無血清培養(yǎng)基，取100μl細胞懸液（含1×10 5個細胞）加入Transwell上室，下室加700μl含20%FBS的DMEM培養(yǎng)液。培養(yǎng)24h后棄上室液體，用甲醛固定隔膜上附于外表面的細胞，用棉棒輕輕擦去嵌在隔膜上附于內(nèi)表面的細胞，用0.1%結(jié)晶紫染色15min，取出Transwell小室，置顯微鏡下隨機選擇4個100倍鏡視野進行拍照并計算穿膜細胞數(shù)。

五、細胞遷移實驗

將轉(zhuǎn)染48h后的細胞消化離心，培養(yǎng)基重懸，取10 6個細胞鋪種12孔板常規(guī)培養(yǎng)，設(shè)2個復(fù)孔。當(dāng)細胞鋪滿板底后，使用移液槍10μl槍頭垂直在細胞培養(yǎng)板的孔內(nèi)劃痕，再用PBS輕輕清洗劃脫的細胞，置顯微鏡下觀察劃痕間距并拍照。將12孔板繼續(xù)常規(guī)培養(yǎng)24h，再置顯微鏡下拍照，計算劃痕區(qū)的細胞覆蓋率。

六、與circSEC31A結(jié)合的miRNA篩選

circRNAs通過結(jié)合miRNA來減少或消除miRNA介導(dǎo)的靶基因的抑制作用。通過網(wǎng)站circBank獲得與circSEC31A結(jié)合的10個候選miRNA，包括miR-1184、miR-17-3p、miR-7109-3P、miR-1251-3P、miR-1273g-3P、miR-181a-2-3P、miR-200b-3P、miR-200c-3P、miR-208a-5P、miR-208b-5p，采用circSEC31A探針及oligo陰性對照探針進行RNA Pull-down實驗，篩選與circSEC31A結(jié)合的miRNA。收集胰腺癌細胞，用裂解液處理后置－80℃?zhèn)溆?。磁珠用BSA和酵母tRNA包被，棄去上清后分別加入circSEC31A探針及oligo陰性對照探針孵育2h以包被磁珠。取出冷凍的細胞裂解液，解凍后離心。取500μl細胞裂解液上清與包被探針的磁珠置4℃孵育過夜，收集捕獲的RNA復(fù)合物。采用qRT-PCR檢測與circSEC31A結(jié)合的miRNA。其中circSEC31A探針是與circSEC31A接口位置互補結(jié)合的生物素標(biāo)記的RNA，可捕獲細胞內(nèi)源性circSEC31A以及與circSEC31A結(jié)合的分子復(fù)合物，序列為UUUUCCUCUUUAAUGUGCUGGUUGGUGUUGUCAGG。oligo陰性對照探針無義序列為UUGUACUACACAAAAGUACUG。

七、胰腺癌細胞株P(guān)DK1、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表達檢測

利用RNAInter、mirPath和ENCORI數(shù)據(jù)庫預(yù)測miR-200c-3p可能存在結(jié)合位點的下游靶基因。采用qRT-PCR檢測與miR-200c-3p結(jié)合的mRNA。PDK1 mRNA正向引物序列為5′-AGTTCATGTCACGCTGGGTA-3′，反向引物序列為5′-CAGCTTCAGGTCTCCTTGGA-3′。

采用蛋白質(zhì)印跡法檢測胰腺癌細胞株P(guān)DK1、Akt、p-Akt蛋白表達量。胰腺癌細胞經(jīng)胰酶消化并收集，加RIPA裂解液、蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑，于冰上劇烈震蕩裂解30min，離心取細胞總蛋白，用BCA法檢測蛋白濃度。取20μg蛋白，常規(guī)行蛋白質(zhì)印跡法進行檢測目的蛋白的表達，以GAPDH為內(nèi)參。PDK1、Akt、p-Akt一抗工作濃度分別為1∶2000、1∶1 000、1∶1000；二抗工作濃度為1∶2000。最后使用Syngen G曝光機成像，以目的蛋白與內(nèi)參條帶灰度值比表示蛋白相對表達量。

八、統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 26.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，GraphPad Prism 9軟件作圖。正態(tài)分布的計量數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

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結(jié)? ? 果

一、胰腺癌細胞株circSEC31A表達及鑒定

正常胰腺細胞株HPDE和胰腺癌細胞株BXPC-3、SW1990、PANC1、CaPan-2的circSEC31A表達量分別為1.000±0.120、1.920±0.130、2.93±0.528、4.557±0.692、5.247±0.194，4株胰腺癌細胞circSEC31A的表達量較HPDE細胞株均明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=56.915，P＜0.001）。選用表達量較高的PANC1和CaPan-2細胞株進行后續(xù)實驗。

RNase R降解實驗及放線菌素D實驗結(jié)果表明，circSEC31A的環(huán)狀結(jié)構(gòu)具有高度穩(wěn)定性，不會被RNase R降解，且較SEC31A mRNA具有更長的半衰期，較持久的穩(wěn)定性。

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二、circSEC31A沉默可抑制胰腺癌細胞侵襲及遷移能力

PANC1 siR-NC組、siR-circSEC31A#1組，siR-circSEC31A#2組circSEC31A表達量分別為1.000±0.120、0.243±0.075、0.302±0.061；CaPan-2 3組circSEC31A表達量分別為1.000±0.109、0.325±0.063、0.224±0.059。兩株細胞的siR-circSEC31A組circSEC31A表達量均顯著低于siR-NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F值分別為67.000、82.595，P值均＜0.001），表明circSEC31A可以被siR-circSEC31A有效沉默。

Transwell實驗結(jié)果顯示，PANC1、CaPan-2細胞的siR-circSEC31A#1組、siR-circSEC31A#2組穿膜細胞數(shù)均顯著低于siR-NC組(表1)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表明circSEC31A沉默后，PANC1及CaPan-2細胞的侵襲能力顯著下降。

劃痕實驗結(jié)果顯示，與PANC1 siR-NC組和CaPan-2 siR-NC組劃痕區(qū)細胞覆蓋率比較，PANC1 siR-circSEC31A#1組、siR-circSEC31A#2組和CaPan-2 siR-circSEC31A#1組、siR-circSEC31A#2組胰腺癌細胞劃痕區(qū)細胞覆蓋率均顯著下調(diào)(表1)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表明circSEC31A沉默后可抑制胰腺癌細胞的遷移能力。

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三、circSEC31A通過與miR-200c-3p結(jié)合促進胰腺癌細胞的侵襲和遷移

應(yīng)用circSEC31A探針篩選miRNA的結(jié)果顯示，PANC1、CaPan-2細胞circSEC31A富集的miRNA以miR-200c-3p為主（圖1）。與oligo探針組比較，PANC1細胞circSEC31A探針組結(jié)合的 miR-200c-3p量顯著增加（2.237±0.175比1.000±0.091），CaPan-2細胞結(jié)合的miR-200c-3p量也顯著增加（2.166±0.156比1.000±0.153），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t值分別為10.836、9.252，P值均＜0.001），提示circSEC31A在胰腺癌細胞中主要與miR-200c-3p結(jié)合。

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為進一步驗證miR-200c-3p在胰腺癌中發(fā)揮的生物學(xué)功能，設(shè)計靶向miR-200c-3p的siRNA轉(zhuǎn)染胰腺癌細胞（siR-miR-200c-3p組）進行后續(xù)實驗。Transwell結(jié)果顯示，PANC1、CaPan-2細胞siR-miR-200c-3p組穿膜細胞數(shù)均顯著多于siR-NC組、siR-miR-200c-3p＋siR-circSEC31A組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（表2）。細胞劃痕結(jié)果顯示，PANC1、CaPan-2細胞siR-miR-200c-3p組劃痕區(qū)細胞覆蓋率均顯著高于siR-NC組、siR-miR-200c-3p＋siR-circSEC31A組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（表2）。提示沉默miR-200c-3p可促進胰腺癌細胞侵襲和遷移的能力，而沉默circSEC31A可顯著削弱此促進作用。

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四、circSEC31A通過miR-200c-3p/PDK1/Akt軸調(diào)控胰腺癌的侵襲及轉(zhuǎn)移

利用RNAInter、mirPath和ENCORI數(shù)據(jù)庫預(yù)測miR-200c-3p可能存在結(jié)合位點的下游靶基因，將所得的基因取交集后在KEGG數(shù)據(jù)庫中進行通路富集分析，結(jié)果顯示PI3K/Akt通路在所富集的通路中排名最高（圖2）。此外，在PDK1的3′UTR序列中發(fā)現(xiàn)了與miR-200c-3p特異性結(jié)合的互補位點（圖3），提示在胰腺癌細胞中PDK1是miR-200c-3p的下游靶基因。

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進一步通過沉默胰腺癌細胞miR-200c-3p及circSEC31A的表達探討circSEC31A對PDK1調(diào)控作用的影響。結(jié)果顯示，PANC1、CaPan-2細胞siR-miR-200c-3p組PDK1 mRNA表達量均顯著高于siR-NC組和siR-miR-200c-3p+siR-circSEC31A 組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P值均＜0.001，表3），提示沉默miR-200c-3p可上調(diào)PDK1 mRNA的表達量，而在此基礎(chǔ)上進一步敲低circSEC31A可逆轉(zhuǎn)上調(diào)PDK1的作用，表明circSEC31A是通過結(jié)合miR-200c-3p進而上調(diào)PDK1的表達。

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蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示，PANC1、CaPan-2細胞siR-NC組、siR-circSEC31A#1組、siR-circSEC31A#2組總Akt蛋白表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義；而siR-circSEC31A#1組和siR-circSEC31A#2組PDK1、p-Akt蛋白表達水平均顯著低于siR-NC組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（表4、圖4），提示沉默circSEC31A可降低胰腺癌細胞中PDK1蛋白的表達進而使p-Akt蛋白的表達量下調(diào)。以上結(jié)果表明circSEC31A上調(diào)PDK1的表達，并特異性激活PI3K/Akt信號通路。

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討? ? 論

近年來，circRNAs在高等真核生物疾病發(fā)生機制中的作用越來越受到重視。理論上，circRNAs的形成與線性mRNA中外顯子跳躍相關(guān)，然而并非所有跳過的外顯子都能產(chǎn)生circRNAs，還存在其他調(diào)節(jié)因子影響外顯子跳躍后的環(huán)化過程。雖然circRNAs的表達豐度低于其線性RNA，但對于許多基因而言，circRNAs是主要的轉(zhuǎn)錄物，并且大多數(shù)產(chǎn)生circRNAs的母基因可能存在經(jīng)典剪接和反向剪接間的競爭。circRNAs通常以特異性方式表達，廣泛并穩(wěn)定的存在于正常細胞和腫瘤細胞中，其表達的紊亂參與了腫瘤細胞增殖、侵襲、淋巴轉(zhuǎn)移及化療耐藥等多個生物學(xué)的過程。由于具有共價環(huán)狀結(jié)構(gòu)的circRNAs對核酸外切酶活性有顯著抗性，使其在體液中穩(wěn)定存在，因此其具有作為腫瘤診斷、預(yù)后、療效評估的生物標(biāo)志物的潛能。本研究明確了胰腺癌細胞高表達circSEC31A，證實circSEC31A可促進胰腺癌細胞的侵襲和遷移，并發(fā)現(xiàn)circSEC31A通過吸附miR-200c-3p上調(diào)PDK1的表達量，進而激活PI3K/Akt信號通路導(dǎo)致胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的發(fā)生。本研究首次報道了circSEC31A作為促癌基因在胰腺癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮的重要作用，提示circSEC31A可作為胰腺癌潛在的診斷標(biāo)志物和新的治療靶點。

miRNAs是一類小分子非編碼RNA，主要通過與基因mRNA序列互補配對結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控其翻譯和蛋白表達，進而影響腫瘤的進展。miR-200家族作為一個新興的miRNA家族，已被證實對腫瘤細胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移具有良好的抑制作用。miR-200c-3p屬于miR-200家族，參與細胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、細胞凋亡和耐藥性等多種腫瘤進展關(guān)鍵過程的調(diào)控；亦有研究指出，miR-200c可通過調(diào)節(jié)靶蛋白的表達進而抑制胰腺癌細胞的侵襲。然而miR-200c-3p在胰腺癌中發(fā)揮的作用機制迄今為止尚未見報道。本研究結(jié)果顯示，circSEC31A在胰腺癌細胞中結(jié)合miR-200c-3p并拮抗其抑制功能的發(fā)揮，促進了胰腺癌細胞的侵襲及遷移。此外，沉默miR-200c-3p引起胰腺癌細胞遷移侵襲的促進作用可通過circSEC31A下調(diào)而逆轉(zhuǎn)。提示miR-200c-3p可作為胰腺癌發(fā)生、發(fā)展中的抑癌基因，而circSEC31A通過競爭性結(jié)合并拮抗miR-200c-3p的抑癌作用進而促進胰腺癌的惡性進展。該結(jié)論為靶向干預(yù)胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移能力提供了新的理論支持。

PDK1在多種癌癥類型中表達失調(diào)，并參與細胞的各項生物學(xué)功能而影響腫瘤的進展，是癌癥治療中一個理想的干預(yù)靶點。此外，PDK1可調(diào)控PI3K/Akt、RAS/MAPK和MYC等多種重要信號通路，參與腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲，與腫瘤的惡性程度及預(yù)后密切相關(guān)。既往研究表明，PDK1在胰腺癌人群中高表達，促進癌細胞增殖、生長和侵襲，與患者不良預(yù)后相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，miR-200c-3p通過直接與PDK1的3′UTR結(jié)合來下調(diào)PDK1的表達，而circSEC31A通過競爭性結(jié)合miR-200c-3p來上調(diào)PDK1的表達，進而激活PI3K/Akt通路，表明circSEC31A促進胰腺癌進展的分子機制是通過上調(diào)PDK1的表達，激活PDK1/Akt軸進行調(diào)控。

綜上所述，胰腺癌細胞高表達circSEC31A,通過miR-200c-3p/PDK1/Akt軸促進胰腺癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移，circSEC31A可作為胰腺癌潛在的防治靶點和評價腫瘤預(yù)后的重要指標(biāo)，為探究胰腺癌發(fā)生和惡性發(fā)展提出了新的思路，為進一步開發(fā)胰腺癌治療方案提供了理論基礎(chǔ)。

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