今天小海星為大家介紹一下高效液相色譜技術(shù)，高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）又叫高壓、高速、近代液相色譜，通常叫做高效液相色譜。它是60年代中期才建立的一種高效快速分離化合物的方法，到了70年代后期才廣泛用于蛋白質(zhì)的分離純化方面，現(xiàn)已成為分離純化蛋白質(zhì)非常有效的方法之一。

那么HPLC技術(shù)和經(jīng)典常壓色譜相比有什么區(qū)別呢？主要有以下特點(diǎn)：

1、HPLC分離、純化蛋白質(zhì)的速度快。通常半小時(shí)左右可進(jìn)行一次，大大縮短了純化蛋白質(zhì)的時(shí)間

2、分辨率高。一根長(zhǎng)10cm的色譜柱可分離十幾種以上的物質(zhì)且高效相色譜柱可反復(fù)使用

3、適應(yīng)面廣，靈活性強(qiáng)幾乎所有的蛋白質(zhì)根據(jù)它們的性質(zhì)差別（等電點(diǎn)、疏水性、分子量、電荷分布等）都可以用不同HPLC方法進(jìn)行分離提純

4、靈敏度高HPLC現(xiàn)已廣泛采用多種高靈敏度的檢測(cè)器，如紫外、熒光、電導(dǎo)等。熒光的靈敏度可達(dá)10-9g

5、重復(fù)性好在作分析蛋白質(zhì)分析試驗(yàn)時(shí)，誤差一般不超過5%。

6、分離純化種類廣在生物領(lǐng)域中廣泛用于下列產(chǎn)物的分離和鑒定：氨基酸及其衍生物、有機(jī)酸、甾體化合物、生物鹼、抗菌素、糖類、卟啉、核酸及其降解產(chǎn)物、蛋白質(zhì)、酶和肽、脂類等 。

因此，HPLC在蛋白質(zhì)分離純化方面具有極其重要的位置。當(dāng)然HPLC也有它的缺點(diǎn)，例如，儀器設(shè)備價(jià)格昂貴，雖然已有制備柱使用，但制備量還是受到限制，在某些方法中，由于使用有機(jī)溶劑，對(duì)蛋白質(zhì)的活性會(huì)有一定影響。

總而言之，高效液相色譜技術(shù)現(xiàn)已成為分離純化蛋白質(zhì)非常有效的方法，是生物學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。

作者：海星生物

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