研究背景

盡管宮頸癌篩查和使用HPV疫苗已被廣泛使用，但由于轉(zhuǎn)移性，宮頸癌仍然是全球女性癌癥發(fā)病率和死亡率的第四大疾病。轉(zhuǎn)移患者的總生存率仍然較差。因此，生物標志物預測對緩解病情進展至關重要。據(jù)研究，TGF-β通路已被報道與宮頸癌的轉(zhuǎn)移有關。然而，其作用機制尚不清楚。

文獻來源

中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院姚婷婷教授團隊等在Molecular Cancer期刊上發(fā)表“TGF-β signaling promotes cervical cancer metastasis via CDR1as”一文研究成果，研究發(fā)現(xiàn)circRNA CDR1as分子過表達促進了宮頸癌的體內(nèi)外轉(zhuǎn)移，它通過促進IGF2BP1對SLUG mRNA的m6A甲基化調(diào)控，并穩(wěn)定其不被降解，從而促進宮頸癌的轉(zhuǎn)移。也就是說TGF-β信號通路通過CDR1as促進宮頸癌轉(zhuǎn)移，這為宮頸癌治療提供了潛在的靶點。

項目研究

EMT是腫瘤進展早期的標志之一，其信號維持嚴重依賴于TGF-β的激活。作者通過TGF-β激活劑處理Siha細胞，誘導產(chǎn)生EMT表型變化。借助circRNA芯片測序篩選出差異表達的circRNA，細胞水平檢測circRNA CDR1as變化倍數(shù)最高。于是推測CDR1as參與了TGF-β通路誘導的宮頸癌轉(zhuǎn)移。

臨床相關數(shù)據(jù)顯示，CDR1as在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中表達較高，與較短的總生存期和較差的預后相關。但是，CDR1as與腫瘤分級、分期和原發(fā)腫瘤體積之間沒有顯著的相關性。

在腫瘤細胞中過表達 CDR1as可以促進宮頸癌的轉(zhuǎn)移，動物水平體內(nèi)實驗與此一致。CDR1as表達上調(diào)后，上皮標志基因E-cadherin表達減少，間充質(zhì)標記基因N-cadherin和Vimentin波形蛋白表達增加，EMT調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子Slug表達上調(diào)。

利用生物信息學手段進行預測，發(fā)現(xiàn)和miR-203可能與CDR1as/Slug存在互作關聯(lián)。然而在pull down實驗中，CDR1as探針并沒有拉到Slug通路相關的miRNA，也就是說明Slug的激活可能不受miRNA海綿的調(diào)控。CeRNA機制走不通，研究者轉(zhuǎn)從RNA與蛋白互作的角度探討分子機制。RNA下拉分析尋找可能與CDR1as結(jié)合的潛在蛋白，發(fā)現(xiàn)在35kD~70kD之間存在幾個單獨的蛋白條帶。結(jié)合生信顯示IGF2BPs與CDR1as相互作用，Western blot檢測到70 kDa條帶與IGF2BPs 分子量相吻合。RIP 抗IGF2BP1顯示CDR1as明顯富集。以上結(jié)果表明，IGF2BP1可能是一個特定的潛在下游靶點。

基于IGF2BP1的m6A甲基化調(diào)控作用，進一步驗證了IGF2BP1優(yōu)先與Slug mRNA上的m6A修飾位點結(jié)合。沉默IGF2BP1也能抑制CDR1as促進的轉(zhuǎn)移和侵襲潛能。綜上所述，CDR1as與IGF2BP1特異性結(jié)合，以穩(wěn)定和提高Slug的表達。

作者分析了CDR1as上調(diào)后的不同mRNA水平和m6A水平。KEGG和GO分析表明，CDR1as顯著激活了TGF-β的信號，p-smad2和p-smad3表達增加。使用TGF-β抑制劑處理CDR1as過表達細胞，發(fā)現(xiàn)EMT表型被逆轉(zhuǎn)，這表明CDR1as作為激活TGF-β信號通路和EMT促進宮頸癌細胞的轉(zhuǎn)移。

作用機制

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